PRÁCTICA No. “COLIFORMES TOTALES Y FECALES”

ESCUELA POLITÉCNICA NACIONAL

FACULTAD DE INGENIERÍA CIVIL Y AMBIENTAL

INGENIERÍA AMBIENTAL

LABORATORIO DE CALIDAD DEL AGUA

PRÁCTICA No.

“COLIFORMES TOTALES Y FECALES”

Realizado por:

Daniel Arcos

Darío de la Torre

Samuel Caicedo

Suha Benavides

Fecha de Realización:         

Fecha de Entrega:                 [pic 1]

[pic 2]

1. Objetivos:

Determinar el número más probable de coliformes totales de una muestra de agua del Río San Carlos.

2. Marco Teórico:

Las bacterias del género coliformes se encuentran principalmente en el intestino de los humanos y de los animales de sangre caliente, es decir, homeotermos, pero también ampliamente  distribuidas en la naturaleza, especialmente en suelos, semillas y vegetales. Los coliformes se introducen en gran número al medio ambiente por las heces de humanos y animales. Por tal motivo suele deducirse que la mayoría de los coliformes que se encuentran en el ambiente son de origen fecal. Sin embargo, existen muchos coliformes de vida libre.

Tradicionalmente se los ha considerado como indicadores de contaminación fecal en el control de calidad del agua destinada al consumo humano en razón de que, en los medios acuáticos, los coliformes son más resistentes que las bacterias patógenas intestinales y porque su origen es principalmente fecal. Por tanto, su ausencia indica que el agua es bacteriológicamente segura. Asimismo, su número en el agua es proporcional al grado de contaminación fecal; mientras más coliformes se aíslan del agua, mayor es la gravedad de la descarga de heces.

No todos los coliformes son de origen fecal, por lo que se hizo necesario desarrollar pruebas para diferenciarlos a efectos de emplearlos como indicadores de contaminación. Se distinguen, por lo tanto, los coliformes totales -que comprende la totalidad del grupo- y los coliformes fecales -aquellos de origen intestinal-. Desde el punto de vista de la salud pública esta diferenciación es importante puesto que permite asegurar con alto grado de certeza que la contaminación que presenta el agua es de origen fecal.

PROCEDIMIENTO COLIFORMES TOTALES Y FECALES

• Preparar diluciones: 0, 10-1, 10-2, 10-3, 10-4 ,10-5,

10-6,10-7

• Cada dilución será repetida tres veces
• El volumen de caldo requerido para cada dilución es 5 ml.

Parte A: Preparación del medio de cultivo.

1. Determinar el peso de Caldo Verde Brillante (sólido), requerido para preparar el volumen de medio de cultivo. (Peso caldo [g] = 4% Volumen de medio requerido [ml])
2. Diluir el Caldo Verde Brillante con agua destilada hasta alcanzar el volumen de medio requerido.
3. Colocar un tubo Durham invertido dentro de un tubo de ensayo.
4. Llenar el tubo de ensayo del paso anterior con 5ml de medio.
5. Realizar los pasos 3 y 4, hasta completar las 3 repeticiones para cada dilución.

Parte B: Preparación del medio de dilución.

1. Llenar un tubo de ensayo con 9ml de agua destilada.

Parte C: Preparación de la muestra.

1. Homogenizar la muestra.
2. Homogenizar la punta de la micropipeta con la muestra.
3. Colocar 1ml de muestra homogenizada en un tubo de ensayo que contiene agua destilada, preparado en la parte B.
4. Homogenizar el tubo del paso anterior (emplear la micropipeta)

Parte D: Cultivo de coliformes.

1. Inocular un tubo de ensayo preparado en la parte A, con 1 ml de dilución preparada en la parte C.
2. Realizar el paso anterior hasta completar una serie de 3 tubos con la misma dilución.
3. Repetir los pasos 8 y 9  de la parte C, empleando como muestra la dilución preparada anteriormente.

Parte E: Determinación de Coliformes totales.

1. Cultivar las series de diluciones de muestra a 35ºC durante dos días
2. Contar el número de tubos positivos (evidentes debido a la formación de una burbuja en el tubo Durham, o por turbiedad del medio)

Parte F: Determinación de Coliformes fecales.

1. Sembrar nuevamente cada tubo positivo. Inocular dicho sustrato en un nuevo tubo empleando el asa.
2. Cultivar los tubos a 45ºC durante dos días.
3. Contar el número de tubos positivos

4. Datos de la muestra:                

Lugar:        San Carlos

Punto:         D

Responsable de la muestra:    W.S

Hora:                                           8.33 a.m

6. Observaciones:

Se debe tomar en cuenta que al preparar el medio se debe usar el equipo necesario de seguridad, además se preparó medios de cultivo desde 10-1 a 10-8 pero no se utilizó el agua de dilución de 10-8.

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