Preparación del medio de cultivo y monitoreo del medio.

Práctica NO1

Preparación del medio de cultivo y monitoreo del medio

1. INTRODUCCIÓN

El cultivo es el proceso de proliferación de microorganismos al proporcionarles un entorno con condiciones apropiadas. Los microorganismos en proliferación producen réplicas de sí mismos y necesitan los elementos presentes en su composición química. Los nutrientes deben proporcionar estos elementos en una forma que sea accesible desde el punto de vista metabólico. Además, los microorganismos requieren energía metabólica para sintetizar macromoléculas y mantener gradientes químicos esenciales a través de sus membranas. Los factores que deben controlarse durante la proliferación incluyen nutrientes, pH, temperatura, aireación, concentración de sales y fuerza iónica del medio.

1. MARCO TEÓRICO

Agar de Sabouraud Dextrosa

Fue utilizado por primera vez por Raymond Sabouraud en 1892. Más tarde Chester W. Emmons mejoró el medio acercando el pH al neutro y disminuyendo el nivel de glucosa para permitir el crecimiento de otros subcultivos de hongos.

Este es un medio de cultivo que es utilizado para cultivo de mohos y levaduras patógenas y no patógenas. Funciona como medio de enriquecimiento para hongos y que, en caso de contener cloranfenicol u otro antibiótico, se convierte en un medio selectivo para los mismos. El medio contiene peptonas1 y una elevada concentración de glucosa que favorece el crecimiento de los hongos sobre las bacterias. Es utilizado para el cultivo de hongos, especialmente dermatofitos, aunque también pueden desarrollarse en él cierto tipo de bacterias filamentosas tales como Nocardia. El Agar de Dextrosa Sabouraud es una modificación a la fórmula original del Agar de Dextrosa desarrollado por Raymond Sabouraud. Este medio es utilizado para el cultivo de hongos patógenos, particularmente de aquellos asociados con infecciones de piel. La alta concentración de dextrosa y la acidez del pH hacen a éste un medio selectivo para hongos. Con la adición de ciclo heximida, estreptomicina y penicilina, se obtiene un excelente medio para el aislamiento primario de dermatofitos. Este medio es también utilizado para la determinación microbiológica en cosméticos y para evaluar la presencia de hongos en alimentos. En este medio las peptonas proveen la fuente de carbono y nitrógeno para el crecimiento de los microorganismos, la dextrosa actúa como fuente de energía y el agar es agregado como agente solidificante.

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Incubadora

Una incubadora sirve para mantener y hacer crecer cultivos microbiológicos o cultivos celulares, regulando factores de crecimiento viables como por ejemplo la temperatura, la humedad y la ventilación. Las incubadoras vienen en distintos tamaños. Existen incubadoras que tienen la capacidad de controlar temperaturas extremadamente bajas (incubadoras microbiológicas), humedad y niveles de dióxido de carbono (incubadoras para cultivos celulares). Las incubadoras microbiológicas se usan principalmente en el crecimiento y almacenamiento de cultivos bacterianos a temperaturas entre 5 y 37 o C. Por su parte las incubadoras para cultivo celular trabajan a temperatura de 37 o C, simulando las condiciones de la temperatura corporal

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1. SECCIÓN EXPERIMENTAL

1. MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS

1. MATERIALES Y EQUIPOS

• 01  Probeta de 100 ml
• 02  Placas Petri esterilizadas
• 02  Tubos de ensayo esterilizados
• 01  Botella de laboratorio con tapón de rosca
• 01  Luna de reloj
• 01  Espátula
• Papel kraft
• Pabilo
• Plumón indeleble
• Balanza analítica
• Autoclave
• Incubadora
• Agar de sabouraud dextrosa    

1. PROCEDIMIENTO

1. Calculamos la cantidad de Agar Sabouraud Dextrosa. Las instrucciones indicaban  “Combinar 65g de medio con un litro de agua destilada”

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1. Luego pesamos 6.5 g de Agar Sabouraud Dextrosa

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1. Después medimos 100 ml de agua destilada en una probeta de 100 ml y vaciamos el agua destilada a una botella de laboratorio con tapón de rosca

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1. Luego vaciamos los 6.5 g de Agar Sabouraud Dextrosa a la botella de laboratorio con tapón de rosca y agitamos la botella para homogenizar la solución

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1. Después medimos el pH de la solución [pic 12]

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1. Luego llevamos la botella al autoclave

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Una vez cumplido el tiempo sacamos con mucho cuidado la botella con la ayuda de un trapo mojado y lo dejamos enfriar.

1. En el tiempo que esperábamos, escribimos en los tubos de ensayo y en las placas Petri esterilizadas con plumón indeleble el nombre del agar, el curso, turno y el nombre del responsable de monitorear el medio de cultivo.

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1. Luego que enfrió la botella, vaciamos la solución a las placas Petri esterilizadas.

Nota: este procedimiento lo realizamos cerca al mechero encendido para evitar la contaminación.

Recuerde: El abrir la Placa Petri, vaciar la solución y cerrar la Placa Petri debe ser lo más rápido posible para también evitar la contaminación.

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Una placa petri fue destapada para que se solidifique expuesta al ambiente de laboratorio mientras la otra placa petri se tapó inmediatamente vaciada la solución y no fue abierta en ningún momento.

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