Procedimiento para la identificación de microorganismos

3. MATERIALES UTILIZADOS

· Hisopo/medio de transporte Stuartstuartxm5.jpg

· Materiales para la realización de un medio de cultivo (matraz erlenmeyer, varilla…)

· Materiales para realizar una tinción de Gram (portaobjetos, pipeta Pasteur…)

· Tira oxidasa

· Peróxido de hidrógeno (catalas)

· Microscopio

· Autoclave

· Campana de anaerobiosis

· Guantes

· Bata

. Papel de Filtro

4. PROCEDIMIENTO

Una vez obtenida la muestra, exudado faríngeo, se procederá a la identificación de los microorganismos que posiblemente estén presentes en la misma. Para ello se realizarán las pruebas que a continuación se describen:

· En primer lugar se escogerán los medios específicos para la muestra de exudado faríngeo:

- Estreptococos β-hemolíticos; Columbia ANC + 5% sangre de cordero – agar.

- Haemophilus; Chocolate Poly Vitex Bacitracina – Agar.

- Cándida albicans, levaduras; Sabouraud Gentamicina Cloranfenicol – agar.

- Pneumococos; Columbia ANC + 5% sangre de cordeno – agar.

- Staphylococcus aureus; Chapman – medio.

No se ha utilizado el medio Loeffler, puesto que en el laboratorio no se disponía de él; no obstante, es un medio específico para el microorganismo Corynebacterium diphteriae el cual es muy improbable que no se hallara en la muestra.

A continuación se procede a sembrar cada uno de los medios por la técnica de los cuatro cuadrantes, y así obtener un mejor aislamiento de las colonias.

El primer día se incubaron todos los medios en aerobiosis, excepto el de agar sangre, que se incubó dentro de una campana de anaerobiosis. Para crear dicho ambiente de anaerobiosis, se introdujo en la campana un sobre que tiene como función quelar el oxígeno disponible, tanto en el espacio interno de la campana como en el de la placa. Para comprobar que estas condiciones anaeróbicas se han dado, se introdujo también dentro de la campana una tira, la cual en un principio es de color azul, y tras el periodo de incubación, si efectivamente se han dado dichas condiciones, esa coloración cambiará a transparente. La incubación tuvo una duración de 24 horas a 37⁰C.

El segundo día, todos los medios que anteriormente fueron incubados en aerobiosis, se incubaron en anaerobiosis como ya se explicó en el párrafo anterior. Además se sembró otra placa de agar sangre, pero esta vez se incubó en aerobiosis. Esta segunda incubación tuvo una duración de 24 horas a 37⁰C.

En segundo lugar, se realizó la visualización macroscópica a las placas en las que se produjo crecimiento bacteriano, éstas placas corresponden con las dos de agar sangre, una incubada en condiciones de aerobiosis y otra en anaerobiosis. En ambas placas se observó que las colonias tenían un halo de hemólisis correspondiente a la beta hemólisis. En un último momento se visualizaron las dos placas con la luz ultravioleta, para así diferenciar entre diferentes géneros de microorganismos.

En tercer lugar, se realizaron dos tinciones de Gram, una de cada placa, para así diferenciar tanto la forma, agrupación, morfología de estos microorganismos, así como las características de su pared bacteriana, Gram positivos o Gram negativos.

Por último, se realizaron dos pruebas bioquímicas, catalasa y oxidasa a las dos placas.

- Placa agar sangre en aerobiosis: La catalasa se realizó

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