Pruebas de inmunologia

 1. Proteína C Reactiva

La proteína C reactiva fue la primera proteína de fase aguda. La respuesta de fase aguda es un fenómeno fisiopatológico de emergencia" que aparece al desequilibrarse ciertos mecanismos destinados a mantener en equilibrio las condiciones del cuerpo La PCR forma parte de la inmunidad innata y su síntesis es inducida como respuesta al daño tisular, infecciones, procesos inflamatorios y neoplasias. Es producida principalmente por los hepatocitos con una vida media de 20 horas y no se encuentra afectada su concentración por la ingesta de alimentos. Es decir es constante bajo cualquier tipo de condición. 1

1.1 TÉCNICAS:

Las técnicas a continuación descritas serán el cualitativo, semicuantitativo y cuantitativo.

PCR-Látex Aglutinación en porta:

Método cualitativo

1. Antes de iniciar el test se tiene que poner a temperatura los reactivos ya que la sensibilidad disminuye a  temperaturas bajas.

2. Colocar una gota (50 ul) del suero del paciente al círculo de la prueba en la placa. .

3. agregue una gota de la suspensión al círculo de la prueba.

4. Mezcle las gotas con un palillo  asegurando la  cobertura del círculo de la prueba con la mezcla.

6. Suave y uniformemente rote la prueba por 2 minutos  a  80 – 100 r.p.m.  Mayor duración al tiempo sugerido puede originar la aparición de falsos positivos. 2

PCR SEMICUANTITATIVA:

1 En caso de haber aglutinación procedemos a realizar disoluciones  de la siguiente manera:

2 En 5 tubos enumeramos  1:4, 1:6, 1:8, 1:16, 1:32

3 En el primer tubo colocamos 50 ul de suero del paciente y 50ul de agua destilada en este caso el tubo 1:4

4 Pasamos 50ul de esta dilución al siguiente tubo que seria 1.6 y así sucesivamente hasta llegar al último tubo.

5 De cada dilución colocamos 50ul en los pocillos de la placa de látex en orden de las diluciones hasta que haya o no aglutinación. 2

1.2 INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:

La presencia de aglutinación indica una concentración de PCR igual o superior a 6 mg/L . Esto se evidencia con la presencia de aglutinación en la placa.

 En  cambio en el método semicuantitativo, se define el título como la dilución mayor que da resultado positivo. 2

La concentración aproximada de PCR  se obtiene aplicando la siguiente fórmula:

6 x Título de PCR = mg/L 2

1.3 VALORES DE REFERENCIA:

Hasta 6 mg/L

1.4 SIGNIFICADO CLINICO

 1)  En el caso de enfermedades inflamatorias reumáticas como la artritis reumatoide y la espondilitis anquilosante y  la enfermedad de Crohn.

2) El seguimiento de la respuesta al tratamiento de algún proceso inflamatorio o infeccioso, como por ejemplo una endocarditis bacteriana o también en procesos virales.

3) La detección de una infección simultánea en las enfermedades caracterizadas por una respuesta de fase aguda moderada describiendo el caso del  LES.     1

4) En el caso de un Infarto agudo de miocardio.

5) El incremento  de esta proteína se produce después de unas horas de desarrollarse la inflamación o proceso pudiendo alcanzar niveles de 300 mg/L en 12-24 horas. 2

2 FACTOR REUMATOIDEO (FR)

Los FR son  anticuerpos dirigidos contra la fracción Fc de las inmunoglobulinas G.  Entre un 5 -10% de las personas sanas pueden presentar FR suero se piensa que puede tener una función fisiológica, se ha descrito que el desarrollo del FR en suero ayude a la formación de complejos inmunes que sean de fácil eliminación y así se eviten enfermedades por acumulo de los mismos. 3

2.1PROCEDIMIENTO

CUALITATIVO

1. Se recomienda temperar los reactivos ya que la sensibilidad disminuye a  temperaturas bajas.

2. Colocar una gota (50 ul) del suero del paciente al círculo de la prueba en la placa. .

3. agregue una gota de la suspensión al círculo de la prueba.

4. Mezcle las gotas con un palillo asegurando la  cobertura del círculo de la prueba con la mezcla.

5. colocar en el agitador por almenos 2 minutos de 80 a 100 rpm. Mayor duración al tiempo sugerido puede originar la aparición de falsos positivos. 4

FR SEMICUANTITATIVA:

1 En caso de haber aglutinación en el método anterior  procedemos a realizar disoluciones  

2 En 5 tubos enumeramos  1:4, 1:6, 1:8, 1:16, 1:32

3 En el primer tubo colocamos 50 ul de suero del paciente y 50ul de agua destilada en este caso el tubo 1:4

4 Pasamos 50ul de esta dilución al siguiente tubo que seria 1.6 y así sucesivamente hasta llegar al último tubo.

5 De cada dilución colocamos 50ul en los pocillos de la placa de látex en orden de las diluciones hasta que una no de aglutinación. 4

2.2 INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS:

La  aglutinación indica una concentración de FR igual o superior a 8UI/mL.

En el método semicuantitativo, se define el titulo correspondiente al tubo en el cual se dio la aglutinación.

La concentración aproximada de FR en la muestra del paciente se obtiene aplicando la siguiente fórmula:

 8 x Título de FR = UI/mL

2.3 VALOR DE REFERENCIA:

Hasta 8 UI/Ml 4

2.4 SIGNIFICADO CLINICO:

Autoinmunes:

Artritis reumatoide

Lupus eritematoso sistémico

Fibrosis pulmonar

Enfermedades no autoinmunes:

Endocarditis bacteriana

Tuberculosis

Paperas, gripe, herpes, hepatitis C Y B.   3

3. ASTO

Los pacientes con faringitis por estreptococo del grupo A, presentan al redor del 80% tienen un título elevado de ASTO.

 Aumentan sus títulos entre los 7 - 10 días después de la infección inicial por estreptococo del grupo A y alcanzan la máxima expresión  entre la tercera y la sexta semana, y su descenso comienza  después de 6 a 8 meses, pero pueden mantenerse por un extendido tiempo  en que sean propensos a reinfecciones.

El método más usado de detección de los títulos de ASTO es el de inhibición de hemolisina O. 5

3.1 PROCEDIMIENTO:

CUALITATIVO

1. Se recomienda temperar los reactivos ya que la sensibilidad disminuye a  temperaturas bajas.

2. Colocar una gota (50 ul) del suero del paciente al círculo de la prueba en la placa. .

3. Agregar una gota de la suspensión o 50ul  (reactivo) al círculo de la prueba.

4. Mezcle las gotas con un palillo asegurando que la extensión de la mescla sea uniforme.

5. Por ultimo  colocar en el agitador por almenos 2 minutos de 80 a 100 rpm. Mayor duración al tiempo sugerido puede originar la aparición de falsos positivos. 6

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