Práctica espectrofotometrica Glucosa.

Práctica #1

Glucosa

Objetivo general

Que el alumno sea capaz de procesar pruebas de química sanguínea de seis elementos con la calidad requerida para obtener resultados óptimos y confiables debido a la importancia de estas pruebas que no pueden ser procesadas de otra forma.

Fundamento

La glucosa oxidasa (GOD) cataliza la oxidación de glucosa a ácido glucónico. El peróxido de hidrógeno (H2O2), producido se detecta mediante un aceptor cromogénico de oxígeno, fenol-ampirona en presencia de peroxidasa (POD):

β-D-Glucosa + O2 + H2O ⎯⎯ ⎯→ Ácido glucónico + H GOD 2O2

H2O2 + Fenol + Ampirona ⎯⎯⎯→ Quinona + H POD 2O

La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de glucosa presente en la muestra ensayada.

Materiales

Micro pipeta con capacidad para

100 mM.

Espectrofotómetro

Suero o plasma muestra

Reactivo de Glucosa

Procedimiento GLUCOSA

Antes debemos verificar que el espectrofotómetro este en el rango para medir absorbancia, a 505 nm. (Rango 500-546 nm.) y la temperatura correcta y a ver pasado el Estándar.

Verificar que el nombre del paciente sea el correcto y todo este bien rotulado.

1.- Poner en la gradilla 3 tubos ya marcado con el nombre del paciente y nombre de la prueba

2.- poner 1 ml de reactivo de glucosa en cada tubo de ensayo

3.- poner 10 uL de suero problema en cada tubo de ensayo donde previamente ya se puso el reactivo

4.- Esperar 10 minutos a temperatura ambiente

5.- leer las absorbancias ajustando a cero el espectrofotómetro con el blando de reactivo. El color resultante es estable por lo menos treinta minutos.

Pasar del tubo a la cubeta del espectrofotómetro para leer absorbancia.

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