PRACTICA DE GLUCOSA

PRACTICA No. 1

“DETERMINACIÓN DE GLUCOSA (MÉTODO DE GLUCOSA OXIDASA”

OBJETIVO.- Ejecutar e interpretar la determinación de glucosa con un análisis reflexivo de interacción teórico practico en el diagnóstico de alteraciones clínico- metabólicas.

INTRODUCCIÓN.- La Glucosa Oxidasa (GOD) cataliza la oxidación de glucosa a ácido glucónico. El peróxido de hidrógeno (H2O2), producido se detecta mediante un aceptor cromogénico de oxígeno, fenol-ampirona en presencia de peroxidasa (POD).

La intensidad de color formado es proporcional a la [ ] de glucosa presente en la muestra ensayada.

MATERIAL Y REACTIVOS

R 1

Tampón TRIS pH 7.4

Fenol 92 mmol./L

0.3 mmol./L

R 2

Enzimas Glucosa oxidasa (GOD)

Peroxidasa (POD)

4.- Aminofenazona (4-AF)

GLUCOSE CAL Patrón primario acuoso de glucosa 100 mg/dL

- Sistema Vacutainer

- 4 tubos de ensaye

- 1 pipeta serológica 1 ml.

- 1 pipeta automática

- 3 puntas amarillas

- 1 vaso de precipitados

- 1 pipeta Pasteur con chuzo

PROCEDIMIENTO:

1.- Obtener una muestra de sangre venosa por el método de Vacutainer sin anticoagulante (tubo tapón amarillo o rojo), rotular con nombre del paciente donador, fecha y número de folio.

OBSERVACIONES.- en este primer paso debemos de obtener nuestra muestra sanguínea de una manera adecuada y con higiene, y a parte obtener un tubo de tapón rojo, auqnue se recomienda, que para este tipo de pruebas se obtenga con un tubo con tapón amarillo.

2.- Una vez coagulada la muestra, centrifugar a 3500 rpm por 4 minutos y separar el suero en un tubo con ayuda de una pipeta Pasteur, el suero obtenido debe de estar libre de hemolisis.

La aplicación del tiempo preciso es un importante factor para un resultado verídico y eficaz, por ello a la hora de centrifugar se debe considerar la velocidad apropiada y el tiempo especificado.

3.- Preparar el reactivo de trabajo (RT): disolver el contenido de un vial de R 2 Enzimas en un frasco de R 1 Tampón. Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido.

Estabilidad: 1 mes a conservación de 2-8°C o 7 días a temperatura ambiente (15-25°C)

4.- Rotular 3 tubos como, blanco, patrón y muestra respectivamente, y agregar en cada uno según se indica:

Blanco

Patrón Muestra

RT (mL9 1,0 1,0 1,0

Patrón (µL) -- 10 --

Muestra (µL) -- -- 10

Longitud de onda: ……………… 505 nm (490-550)

Debemos tener cuidado a la hora de agregar los reactivos y la muestra, pues una gota varia en el resultado, lo que puede llevar a obtener falsos positivos o falsos negativos .

5.- Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.

Se debe calibrar antes de usarlo.

6.- Mezclar e incubar 10 minutos a 37°C ó 30 min. a temperatura ambiente (15-25°C).

La aplicación del tiempo preciso es un importante factor para un resultado verídico y eficaz, por ello a la hora de incubar debe ser el tiempo especificado.

7.- Leer la absorbancia (A) del Patrón y la muestra, frente al Blanco de reactivo a 505 nm (490–550). El color es estable como mínimo 30 minutos.

En esta práctica, se llevó a cabo con un espectrofotómetro más rápido pues de inmediato da los resultados, aunque hay que considerar que los tubos deben ir con la cantidad precisa, para obtener resultados confiables.

8.- Realizar los cálculos correspondientes para determinar la concentración de glucosa de acuerdo a lo siguiente:

(A) Muestra x 100 (Conc. Patrón) = mg/dL de glucosa en la muestra

(A) Patrón

Absorbancia

Patrón 0.250

Muestra 0.122

Sustitución

(A) 0.122 x 100 = 48.8 mg/dL de glucosa en la muestra

(A) 0.250

Factor de conversión: mg/dL x 0,0555= mmol/L.

Resultado

48.8 mg/dL = 2.70 mmol/L

9.- Comparar los resultados conforme a los Valores de Referencia de suero:

60-110 mg/dL = 3.33-6.10 mmol/L

OBSERVACIONES FINALES Y DISCUSIÓN

Al obtener el resultado, nos dimos cuenta que de acuerdo a los valores de referencia, el nivel de glucosa estaba muy bajo. Comentando llegamos a la conclusión que había ocurrido esto porque no se agregó la cantidad correcta del reactivo al tubo Patrón, y esto fue lo que nos dio como resultado, la cantidad de glucosa muy baja.

Notoriamente está por debajo de los límites inferiores, así que, primero

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