Reporte de práctica sobre la determinación de glucosa

[pic 1]Tecnológico Nacional de México[pic 2]

Instituto Tecnológico de Durango

Ingeniería Bioquímica

Cuarto Semestre

Análisis Instrumental

Unidad I

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Práctica 1: Determinación de concentración de glucosa

Docente: 

        Reyes Hinostroza Dulce María.

Alumna:         

• Villanueva Cumplido Alejandra

No. de control: 19040695.

Fecha de entrega: 

Domingo 14 de marzo de 2021

Introducción

Los hidratos de carbono son compuestos orgánicos formados fundamentalmente por C, O e H a partir de los cuales se puede obtener energía con gran rapidez y que aportan, aproximadamente, el 50% de las calorías que recibimos de la dieta. Se ingieren en forma de polisacáridos (ej. almidón), disacáridos (ej. sacarosa y fructosa) o monosacáridos (ej. glucosa y galactosa). En cualquier caso, se desdoblan en el intestino hasta obtener monosacáridos que son absorbidos y transformados en glucosa a nivel hepático.

La glucosa es la principal fuente de energía en los seres vivos. Por tal razón es un metabolito fundamental en los procesos biológicos. La principal función bioquímica de la glucosa es la de proporcionar energía para los procesos de la vida. El adenosín trifosfato ("ATP") es la fuente de energía universal para las reacciones biológicas. La oxidación de la glucosa por las vías glucolítica y del ácido cítrico es la fuente principal de energía para la biosíntesis del ATP

La determinación cuantitativa de este biocompuesto, ha sido objeto de muchos estudios y la literatura ofrece diversas técnicas de análisis que varían de acuerdo con diferentes factores como la naturaleza de la muestra, los contenidos de glucosa y la viabilidad experimental.

Los ensayos clásicos para valorar el consumo de glucosa en modelos de células se fundamentan, principalmente, en el empleado de métodos radiactivos para cuantificar el ingreso de análogos de glucosa marcados radiactivamente. Por otro lado, a nivel laboratorio clínico, la cuantificación de glucosa en muestras biológicas se ha basado en múltiples métodos sencillos y más económicos que su subdividen en químicos (Benedict, Ferrocianuro, o-toluidina, etc.) y enzimáticos (glucosa oxidasa, hexiquinasa y glucosa deshidrogenasa), los cuales utilizan colorimetría para valorar el producto de la reacción.

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Fig. 1.1 Fundamento de reacción para la determinación de la concentración de glucosa por un método enzimático colorimétrico.

Materiales y métodos

Reactivos

• Dos muestras en las que se quiere determinar la concentración de glucosa.
• Disolución patrón de glucosa, 10 mg/dℓ.
• Disolución salina: NaCl 0.9 g/ℓ.
• R: reactivo cromógeno, que contiene:

• glucosa oxidasa (EC 1.1.3.4)
• peroxidasa (EC 1.11.1.7)
• fenol
• 4-aminofenazona (PubChem CID: 6009; InChIKey: RMMXTBMQSGEXHJ-UHFFFAOYSA-N)
• tampón Tris 92 mM, pH=7.4

Material y equipo

• Micropipetas de volumen variable P200 y P1000.
• Pipeta Pasteur.
• Espectrofotómetro UV- VIS.
• Celda para espectrofotómetro.
• Tubos de ensaye o viales grado laboratorio.

Desarrollo de la práctica

1. Se conectó el espectrofotómetro y ajustó la longitud de onda a 505 nm.
2. Utilizando las micropipetas correspondientes de volumen variable, se colocaron las mezclas de las sustancias con los volúmenes descritos en la siguiente tabla:

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1. Después de haber preparado las mezclas, se añadió 1 mℓ del reactivo cromógeno a cada uno de los tubos.
2. Se esperó 15 minutos virtuales para que se desarrollara la reacción.
3. Se usó la pipeta Pasteur para transferir el contenido del tubo número 0 a la celda del espectrofotómetro.
4. La celda se metió al espectrofotómetro y se pulsó el botón “A=0”, con el objetivo de calibrar el equipo. Después, se retiró la celda y se vació en el bote de desechos.
5. Utilizando la pipeta Pasteur, se transfirió el contenido de cada uno de los viales a una celda distinta, metiendo cada una de ellas al espectrofotómetro y anotando el valor de absorbancia. Se desechó el contenido de la celda después de haber hecho la lectura.
6. Con los resultados obtenidos de la absorbancia de cada mezcla de acuerdo a su concentración de glucosa, se construyó una tabla para facilitar su interpretación.
7. Se elaboró una gráfica representando las absorbancias obtenidas en cada tubo preparado con glucosa patrón frente a la concentración de la glucosa.
8.  A partir de la gráfica del punto anterior, se hizo una regresión lineal para obtener la concentración de las siguientes sustancias problema, mencionadas en la tabla de sustancias.

Resultados

Código de la práctica: 135

Tabla donde se concentran los resultados obtenidos de las lecturas de las mezclas de concentración de glucosa conocida.

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Gráfica 1.1. Resultados de concentración de glucosa contra la absorbancia.

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