Purificacion De Un Compuesto Por Columna Cromatografica

“PURIFICACION DE UN COMPUESTO POR COLUMNA CROMATOGRAFIA”

Objetivo:

 Purificación de una mezcla de indicadores por columna cromatografía

Introducción:

La cromatografía es una técnica que permite la separación de los componentes de una mezcla debido a la influencia de dos efectos contrapuestos.

 Retención: Efecto producido sobre los componentes de la mezcla por una fase estacionaria, que puede ser un sólido o un líquido anclado a un soporte sólido.

 Desplazamiento: Efecto ejercido sobre los componentes de la mezcla por una fase móvil, que puede ser un líquido o un gas.

El fenómeno de migración de los componentes de una mezcla a lo largo de la fase estacionaria, impulsados por la fase móvil, recibe el nombre de elución. La mezcla a separar se deposita sobre la fase estacionaría, mientras que la móvil atraviesa el sistema desplazando a los componentes de la mezcla a distinta velocidad, dependiendo de la magnitud de sus interacciones relativas con ambas fases. Las dos fases se eligen de forma que los componentes de la muestra se distribuyan de modo distinto entre la fase móvil y la fase estacionaria. Aquellos componentes que son fuertemente retenidos por la fase estacionaria se mueven lentamente con el flujo de la fase móvil; por el contrario los componentes que se unen débilmente a la fase estacionaria, se mueven con rapidez. Como consecuencia de la distinta movilidad, los componentes de la muestra se separan en bandas o zonas discretas que pueden analizarse cualitativa y/o cuantitativamente.

 Cromatografía en columna: Se emplea para la separación de mezclas o purificación de sustancias a escala preparativa. Como fase estacionaria se usa, generalmente, gel de sílice o alúmina dentro de una columna. La elección del disolvente es crucial para una buena separación. Dicho disolvente pasa a través de la columna por efecto de la gravedad o bien por aplicación de presión (cromatografía flash). La columna se prepara mezclando el soporte con disolvente y se rellena la columna poniendo en el fondo de ésta un poco de algodón o lana de vidrio, para evitar que la sílica o la alúmina queden retenidas en la columna y que el disolvente se engrasada hasta el nivel del soporte. A continuación se introduce la muestra por la parte superior de la columna y se eluye con el disolvente elegido, recogiéndose por lo general en tubos de ensayo. Una columna de cromatografía es un tubo de vidrio relleno con una sustancia sólida de propiedades adsorbentes constituida por pequeñas partículas: gel de sílice y alúmina son las más usadas. Este relleno es lo que se conoce en cromatografía como la fase estacionaria. A través de la columna se hará pasar una corriente de un disolvente o mezcla de disolventes denominada eluyente y/o fase móvil.

Material:

Pinzas de 3 dedos

Gradilla

Soporte Universal

Tubos de Ensayo

Vaso de pp de 100 mL

Probeta de 15 mL

Espatula

Embudo

Pipetas de 1 y 5 mL

Matraz kitasato de 100 mL

Columna Para Cromatografia

Silica Gel

Etanol

Trietilamina

Método:

1.- Se sujeta la columna en posición vertical, a un soporte utilizando 2 pinzas, se coloca un matraz Erlenmeyer en la parte inferior y un embudo en la parte superior.

2.- En un vaso de pp se colocan 5 g de silica gel y 50 mL de etanol.

3.- Se vierte un poco de etanol a la columna, colocando previamente un tapón de algodón y luego se añade la mezcla previamente preparada, se le dan unos pequeños golpecitos procurando que no se debe de secar la columna.

4.- Se deja que el eluyente baje hasta el absorbente y se cierra la columna, posteriormente se añade la mezcla cuidosamente 1 mL de una solución

...