Quimica . Resultados Práctica no. 2: Esterilización y desinfección

1. Resultados

• Práctica no. 2: Esterilización y desinfección

Para saber que se realizó una correcta esterilización tanto de materiales como medios de cultivo, se utilizó un bioindicador, en este caso se utilizó Bacillus stereothermophylus, el cual realizó un viraje entre un tono café y naranja (Imagen 1 Viraje del bioindicador de roa a café)[pic 1][pic 2]

Posteriormente seleccionamos tres superficies que pudieran contener microorganismos para poder determinar la veracidad de desinfección de las toallitas Lysol:

• La pantalla de un celular, (etiquetado como A1 y D1).
• El piso del laboratorio, (etiquetado como A2 y D2).
• La mesa en la que trabajamos (Mesa #2), (etiquetado como A3 y D3).

En cada una de las superficies se utilizaron hisopos estériles para recolectar la muestra y para mejor adherencia se le colocó solución salina estéril.

Celular: En el antes de la desinfección se manifestaron un número muy pequeño de colonias y en el después, aparentemente ninguna.

Mesa: Para la mesa se presentó el mismo caso que el del celular, una colonia de bacterias en el antes y ninguna en el después.

Piso: En el piso hubo un aumento mayúsculo de colonias comparándolo con los anteriores objetos. Incluso después de la desinfección, el cultivo presentó dos colonias de microorganismos debido al gran número de microorganismos presentes.

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• Práctica no. 3: Preparación de medios de cultivos[pic 7][pic 8]

Pasadas 24 horas después de la preparación y esterilización del agar EMB y Sal y Manitol se observo que efectivamente no habían crecido ningún microorganismo en cada agar preparado.

Despues de la revision de cada agar se dejaron en refrigeracion para la Práctica siguiente.

También en la preparación del agua peptonada fue correcta y a su ves tuvo la esterilización adecuada para su uso en la siguiente práctica.

• Práctica no. 4: Aislamiento de microorganismo en cultivo puro

Finalmente, con el Agar EMB y Sal y Manitol se realizaron estriados de Escherichia Coli y Staphylococcus aureus para observar su morfología.

Tabla 1 Morfología de bacterias E. coli y Staphylococcus aureus

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Recuento de colonias desarrolladas en jugo de Zanahoria

Tabla 2 No. de colonias. Dilución y vaciado en placa

Se consideran las cajas que tienen entre 25 y 250 colonias

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Cálculos para Agar nutritivo

        Se consideran los de la dilución de 1X10-2 ya que se encuentra dentro del parámetro (25-250 colonias)

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Cálculos para PDA

        Se consideran los de la dilución de 1X10-2 ya que se encuentra dentro del parámetro (25-250 colonias)

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Ambos se encuentran dentro del parámetro de mesófilos por lo tanto el jugo si tiene la inocuidad adecuada.

1. Discusiones

• Práctica no. 2: Esterilización y desinfección

Para realizar correctamente la esterilización de materiales y de medios de cultivo se utilizó el bioindicador Bacillus Stearothermophilus el cual es una bacteria Gram positiva en forma de bacilo, termófila que se encuentra distribuida en el suelo, en manantiales calientes y sedimentos oceánicos, esta es causada por descomposición de los productos alimenticios.

En donde se usa para la validación de estudios de esterilización, con el fin de usarla de forma vial en la autoclave de vapor junto con los materiales que se van a esterilizar. Al finalizar el tiempo de 24 horas a una temperatura de 37ºC después de la esterilización se observó el cambio de color de la ampolleta obteniendo un tono entre café y naranja, el cual indica que la esterilización se realizó de manera incorrecta.

• Práctica no. 3: Preparación de medios de cultivos

Efectivamente al pasar 24 horas a una temperatura de 37ºC dentro de la incubadora, se observó que en ningún agar de EMB creció ningún microorganismo, a su vez paso lo mismo con los agares de Sal y Manitol. Al finalizar la revisión de cada agar se dejaron en refrigeración para su uso posterior.

• Práctica no. 4: Aislamiento de microorganismo en cultivo puro

Al comparar las características de las colonias de E. Coli y S. Aureus obtenidas en el libro con dos consultas bibliográficas que hablan sobre dichas bacterias (Lopez, 2015) se supo que efectivamente el cultivo de ambas cepas fue correcto.

Por otro lado, la inocuidad del jugo de zanahoria es adecuada basado en el conteo del numero de colonias en agar PDA y agar nutritivo seguido de los cálculos de EFC/mol de cada agar que contenía entre 25 y 250 colonias.

1. Conclusiones

• Práctica no. 2: Esterilización y desinfección

La esterilización fue incorrecta debido  a algún factor como el tiempo que se dejo dentro del autoclave, la presión no debió ser la adecuada o la temperatura no fue la correcta al momento de la esterilización o en la incubación de la bacteria Bacillus Stearothermophilus.

• Práctica no. 3: Preparación de medios de cultivos

La preparación de medios de cultivo EMB y Sal y Manitol para el estriado de cepas de trabajo fue realizada de forma correcta, se llegó a esta conclusión después de la evaluación de forma físico-visual de cada caja que contenía el agar después de las 24 horas en la incubadora a 37ºC.

• Práctica no. 4: Aislamiento de microorganismo en cultivo puro

Las características de cada cultivo que arrojo la Práctica fueron iguales a las que se consultaron en los libros, dado a entender que el cultivo fue hecho de manera correcta bajo las condiciones físicas adecuadas.

Por otro lado, el conteo de colonias en los agares de PDA y Nutritivo se seleccionó  las que tuvieran entre 25 y 250 colonias bajo el principio de la norma NOM-092-SSA1-1994 para calcular el total poblacional de la bacteria dando el resultado de un liquido con inocuidad adecuada.

1. Cuestionario

• Práctica no. 2: Esterilización y desinfección

1. ¿Cuáles son los métodos de esterilización más utilizados en microbiología? En que materiales se aplica cada uno.

Calor seco

• Flameado: Consiste en la exposición de un objeto a efecto de la llama hasta la incandescencia. Se aplica para esterilizar asas de cultivo de siembra.
• Incineración: El mejor sistema de esterilización para todos aquellos productos en los que no importe su destrucción se aplica en materiales biológicos.
•  Estufa: Calor seco de alta temperatura, 20 min a 180°, 60 min a 160°, se utiliza para esterilizar material de vidrio envuelto en papel, metal, etc.

Calor húmedo: Es mucho más rápida y eficaz que el calor seco ya que; las moléculas del agua desnaturalizan las proteínas de forma irreversible mediante rotura de las uniones H entre los grupos peptídicos a temperaturas relativamente bajas.

• Autoclave: Horno a presión, consiste en una cámara en la que el aire puede ser sustituido por vapor de agua sometido a una presión, se opera a 121° c y 1 atm durante 15min, se aplica para destruir todas las formas vegetativas y esporas, como de igual forma esterilizar el material resistente a esta temperatura y para medios de cultivo.
• Tindalización: Consiste en someter un producto a calentamientos intermitentes entre 56 y 100° c durante 30 min, con lo que se asegura destruir las formas vegetativas. En los intervalos se mantiene a temperatura ambiente 37° C, las esporas germinan y las bacterias resultantes se hacen más sensibles al calentamiento posterior.

Radiaciones

• Luz UV: Es absorbida a la longitud de la onda de 240 a 280 nm por ácidos nucleicos causando daños genéticos alterando las bases. Se utiliza en la preparación de vacunas, cabinas de seguridad biológicas, mesa de laboratorio, etc.
• Radiaciones ionizantes: Actúan lesionando ácidos nucleicos, se les utiliza en procesos industriales para esterilizar dispositivos quirúrgicos, guantes, jeringas, etc.

Agentes químicos

• Óxido de etileno: Gas inflamable y potencialmente explosivo, inactiva los microorganismos sustituyendo átomos de hidrógeno lábiles por otros grupos como hidroxilos, carboxilos, etc. Es un agente efectivo en la esterilización de materiales como catéteres, y prótesis.
• Formol o formal aldehído: Fácilmente soluble en agua que se utiliza al 40% (formalina), usado en forma gaseosa, se emplea para la esterilización hospitalaria y en la industria farmacéutica.  
• Glutaraldehído: Se emplea sumergiendo el material limpio en una solución al 2%, se usa sobre todo en la esterilización de instrumentos ópticos.

1. ¿Por qué al iniciar el calentamiento en la autoclave, debe dejarse salir en aire antes de colocar la válvula para iniciar la esterilización?

A medida que la resistencia calienta el agua del fondo del calderín, se va produciendo vapor que desplaza el aire, haciéndolo salir por la válvula de purgado que está abierta. Esta fase termina cuando se alcanza la temperatura de esterilización. Esto quiere decir que el aire se libera para que se libere la presión y de tal forma llegar a la temperatura deseada.  A este proceso se le determina como fase de purgado.

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