RECONOCIMIENTO Y DIFERENCIACIÓN DE ESTEROIDES .

AREA: CIENCIAS DE LA SALUD

ASIGNATURA: laboratorio de Bioquímica I.

Guía Para complementar la 10 ma. Práctica de Lab. Bioquímica I

Dr. Daniel E. Rodríguez C, M.A. (Farmacéutico)..

PRACTICA No. 10: RECONOCIMIENTO Y DIFERENCIACIÓN DE ESTEROIDES .

I. Objetivos: reconocer y diferenciar los esteroides colesterol y ergosterol .

Esteroides

Los esteroides se encuentran asociados a las grasas. Poseen la estructurara del ciclopentanoperhidrofunantreno. El colesterol es el esteroide de origen animal mas conocido y uno de los mas estudiados, su nombre procede del griego (chole, que quiere decir bilis, por ser el componente más abundante de los cálculos biliares). Está presente normalmente en los tejidos. Por ejemplo se calcula que en un hombre de 80 kilos, hay unos 240 gramos de colesterol. A los médicos por lo general les gusta ver el colesterol total menor a 200mg/dL , con un LDL (colesterol malo) inferior a 130 , el límite elevado del nivel “casi óptimo” , y el HDL (colesterol alto ) superior a 40.

Las plantas contienen una variedad de esteroles.

El ergosterol es un esteroide de origen vegetal. Difiere del colesterol por tener en su estructura dos doble ligaduras adicionales, una entre C7C8 en el anillo B, y la otra en la cadena lateral entre C22-C23.

El ergosterol también se diferencia del colesterol por llevar un grupo metilo extra en posición 2,4. Esta sustancia es considerada como una pro-vitamina, ya que por irradiación con luz ultravioleta adquiere propiedades antiraquíticas ,como consecuencia de la apertura del anillo B.

“Otros esteroides de gran importancia bioquímica son las hormonas sexuales, hormonas de la corteza suprarrenal , vitamina D, glucósidos cardiacos y los ácidos biliares”.(Asbun ,1972, p. 168)

Los esteroides se pueden analizar por medios fotométricos, esto es de manera cuantitativa, para esto se lleva a cabo una reacción química que desarrolle color. Estas reacciones no son específicas, las dan todos los esteroides que lleven uno o mas dobles enlaces en el anillo A o B, los compuestos saturados no desarrollan color.

Reacciones de los esteroides:

-REACCION DE LIEBERMAN- BUCHARD: en esta reacción se trata una muestra de esteroide en cloroformo con anhídrido acético y ácido sulfúrico, se desarrolla un color purpura que pasa a azul verdoso y se estabiliza en verde.

- REACCION DE SALKOWSKI: cuando se trata la muestra de solución clorofórmica de un esteroide, se desarrolla un color rojo-purpura

- REACCION DE ROSENHEIM: se utiliza para diferenciar al ergosterol del colesterol, sólo los compuestos que dan la reacción positiva son aquellos que tienen dos dobles enlaces conjugados. El ergosterol ,por ejemplo, posee dos dobles enlaces conjugados en el anillo B.

Esta reacción consiste en tratar la muestra de solución clorofórmica de un esteroide con una solución de ácido tricloroacético, el desarrollo de un color rojo que cambia a azul pálido indica una reacción positiva.

Reactivos

-Solución de colesterol 0.003 M: se pesan 0.116 g de colesterol y se disuelven en cloroformo ,cantidad suficiente para completar 100mL.

-Solución de ergosterol 0.003 M:se disuelven 0.119 g de ergosterol (recientemente recristalizado de etanol) en cloroformo , se completa el volumen a 100mL.

-Anhídrido acético ,calidad reactivo.

-H2SO4 concentrado,calidad reactivo.

-Ácido tricloroacético.

Experimento I :Técnica : Se toman dos tubos de ensayo bien limpios y secos .A uno se le agrega 2 miL de Solución de colesterol 0.003 M y al otro 2 miL de Solución de ergosterol 0.003 M. Se le agrega a cada tubo 6 miL de cloroformo , y 10 gotas de Anhídrido acético ,calidad reactivo. Se mezcla bien y se adiciona 2 gotas de ácido sulfúrico. Se deja reposar en la obscuridad durante una hora .Seguidamente transcurrido ese tiempo, se mide la densidad óptica en el espectrofotómetro. Empezando en 380 mμ, luego 400 mμ, luego en 20 mμ , hasta llegar a 680 mμ. Se usa cloroformo como blanco. Cada vez que cambia la longitud de onda se lleva la escala a 100 % T con el blanco. Se anotan los valores obtenidos y

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