SEPARACIÓN DE AMINOÁCIDOS POR CROMATOGRAFÍA

SEPARACIÓN DE AMINOÁCIDOS POR CROMATOGRAFÍA

Andrea carolina Martínez abab, Ingris García ramos, Haviesli villalba Alvares,

Santiago santana Juan esteban hoyos.

RESUMEN

La cromatografía es una técnica de análisis químico cuyo objetivo es la separación de sustancias puras en mezclas complejas. En la cromatografía de papel una muestra liquida (fase móvil) fluye por una línea vertical de papel (fase estacionaria). En esta práctica se utilizó la treonina, valina y lisina como muestras de referencia, durante el proceso se tomó un trozo de papel cromatográfico donde se trazó una línea horizontal y se marcaron los puntos para luego sembrar las muestras, seguido de esto en un beaker se agregaron aproximadamente 2,0 ml de fase móvil (que no llegara a la línea antes trazada) y se introdujo el papel, luego esta se selló en la cámara cromatográfica. Cuando el frente del solvente alcanzó la distancia total de su recorrido, se retiró el papel cromatográfico y se llevó a la estufa para secar el solvente y así proceder a realizar la respectiva revelación con la ninhidrina y volverse a someter a calor para poder revelar las manchas respectivas para la identificación de cada aminoácido. El parámetro experimental asociado a la técnica es el Rf (coeficiente de reparto)

INTRODUCCIÓN.

 Los aminoácidos son unidades o monómeros a partir de las cuales se constituyen cadenas polipeptídicas de proteínas, existen alrededor de 300 aminoácidos hallados, pero solo 20 de ellos se encuentran con mayor frecuencia en las proteínas, de los cuales algunos pueden ser sintetizados de manera natural por el organismo y otros no. En esta práctica se lleva a cabo la separación de aminoácidos mediante la aplicación del método de cromatografía de papel, analizados por medio del cálculo de los respectivos RF. La cromatografía en papel es un tipo de cromatografía de reparto, en donde los componentes de una mezcla se separan en base a una distribución diferente entre la fase móvil y la fase estacionaria. La cromatografía es un método de análisis que permite separar, aislar e identificar componentes estrechamente relacionados presentes en mezclas complejos. Existen diferentes tipos de cromatografía en los cuales se utilizan una fase móvil y una estacionaria. De acuerdo a los tipos de fase estacionaria y móvil, estos pueden ser en papel, en capa fina, gas, liquido, en gel y de afinidad. El presente artículo pretende interpretar un cromatograma de una corrida cromatografía en papel y calcular su RF para identificar una muestra determinada.

METODOLOGÍA

Para realizar la práctica se cortó un papel con aproximadamente 15 x 15 cm. Luego, se trazó con lápiz una línea a lo largo de una de las extremidades a 2,5 cm del borde.  Se marcaron cuatro puntos distintos con distancias adecuadas a lo largo de la línea, se aplicó metionina (p1), valina (p2), lisina (p3) y el punto de muestra (p4) de 0,5 cm de diámetro usando tubos capilares. Se grapó el papel en forma circular y se introdujo el papel en la cámara cromatográfica cuidando que la línea marcada no tocara el solvente. Se selló la cámara cromatografía y dejó que el solvente actuara por aproximadamente 30 min hasta que alcanzó 1cm sobre la parte superior del papel. A continuación, se retiró el cilindro de papel y se marcó con lápiz la altura que alcanzo el solvente, se llevó a secar a la estufa, finalmente se adicionó ninhidrina al 0,1 en acetona y se dejó secar. En el grupo de trabajo se tomaron anotaciones al respecto.

RESULTADOS

A continuación se ilustran los resultados obtenidos en la práctica:

1.         [pic 1]

Figura 1: En la imagen se observan las distintas muestras que se utilizaron en la práctica p1, p2, p3, p4.

2.

[pic 2]

Figura 2: trazo de la línea horizontal y dibujo de los puntos para las muestras.

            3.    [pic 3]

 Figura 3: se aprecia como el solvente (fase móvil), asciende por capilaridad a través del papel cromatográfico (fase estacionaria).        

                   .4.    [pic 4]

 Figura 4: Resultado final de la cromatografía de papel. 

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