Separacion Por Cromatografia

SEPARACIÓN DE AMINIOÁCIDOS POR CROMOTOGRAFÍA Romero Gómez Wendy Lorena LABORATORIO DE BIOQUÍMICA GENERAL Docente: Claudia De Paula

RESUMEN

En esta práctica se realizó una de las técnicas más sencillas para identificación de aminoácidos la cual fue la combinación de la cromatografía en capa fina con la reacción de la ninhidrina con la cual se pueden identificar los aminoácidos por la tinción color purpura que se presenta en ellos.

Se investigaron teóricamente algunos métodos de identificación de los aminoácidos, pero principalmente por medio de cromatografía de papel, ya que esta es la técnica que se empleó para el desarrollo de la práctica, así como algunas de las reacciones coloreadas principales para los aminoácidos. Los objetivos principales de esta práctica fueron llevar a cabo la separación de aminoácidos por medio de la cromatografía de papel.

Se logró concluir que el factor de retención depende de las características de cada aminoácido ya que el factor de retención depende de la polaridad del aminoácido, esto se debe a que un alto factor de retención indica gran afinidad del compuesto con el disolvente y si el eluyente es polar atraerá consigo a los compuestos polares, por el contrario si no es polar atraerá entonces a los compuestos no polares.

PALABRAS CLAVES: Aminoácidos, eluyente, cromatografía, factor de retención, fase estacionaria.

INTRODUCCION

La cromatografía es uno de los principales métodos para la separación de especies químicas estrechamente relacionadas en mezclas complejas. La cromatografía es un método físico de separación basado en la distribución de los componentes de una mezcla entre dos fases inmiscibles, una fija o estacionaria y otra móvil.

En todas las separaciones cromatograficas la muestra se disuelve en una fase móvil, que puede ser un gas un líquido o un fluido supercrítico. Esta fase móvil se hace pasar a través de una fase estacionaria inmiscible, la cual se mantienen fija en una columna o sobre una superficie sólida. Las fases se eligen de tal forma que los componentes de la muestra se distribuyen de modo distinto entre la fase móvil y la fase estacionaria. Aquellos componentes que son retenidos con mas fuerza por la fase estacionaria se mueven lentamente con el flujo; por el contrario los componentes que unen débilmente a la fase estacionaria, se mueven con rapidez. Como consecuencia de la distinta movilidad, los componentes de la muestra se separan en bandas discriminadas que pueden analizarse cualitativa y/o cuantitativamente.

La determinación cuantitativa de los aminoácidos ha sido uno de los objetivos más importantes de la metodología bioquímica moderna, ya que en esa forma se logra conocer el porcentaje de aminoácidos en las proteínas, que es uno de los primeros pasos para determinar la estructura primaria de las proteínas, y además es uno de los pasos importantes para determinar las características alimenticias de las diversas proteínas.

Esta determinación puede desarrollarse por medio de diferentes métodos pero la más sencilla y eficaz es la cromatografía en papel, a pesar de que es muy antigua y no es tan tecnológica, lo que hace que muchos de los autores la prefieran, por esta razón en esta práctica la estudiaremos a fondo.

Con esta práctica se logró aprender a realizar la cromatografía en papel, analizar el cromatograma que se registró e identificar lo que ocurre con cada muestra de aminoácido.

MATERIALES Y MÉTODOS

Los materiales utilizados para el desarrollo de esta práctica fueron:

Papel filtro

Se tomó una hoja de papel filtro con dimensiones de 15cm x 15cm, en el cual se trazó con un lápiz una línea a lo largo de una de las extremidades a 2.5cm de los bordes, se marcaron varios puntos con distancias adecuadas a lo largo de la línea anteriormente mencionada, en los cuales se aplicaron las muestras de los aminoácidos y la solución problema.

Soluciones de aminoácidos

Con la ayuda de tubos capilares se aplicaron círculos de 5 aminoácidos diferentes y una solución problema #3 sobre la línea trazada en el papel, con un diámetro aproximado de 0.5cm.

Grapadora

Se le dio forma cilíndrica al papel con ayuda de una grapadora.

Solvente

Se adiciono en la cámara cromatográfica para luego ponerlo en contacto con el cilindro de papel.

Cámara cromatográfica

Se introdujo el cilindro de papel en la cámara cromatográfica, teniendo en cuenta que el solvente no tocara las manchas formadas por los puntos de las muestras, luego se sello la cámara y se dejo que el solvente se desarrollara por una hora, después de este tiempo se retiro el cilindro y se marco con lápiz la altura alcanzada por solvente.

Estufa

El cilindro de papel fue puesto en la estufa para secarlo.

Ninhidrina

Una vez finalizado el secado, se utilizó la ninhidrina para

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