Tècnicas de separación cromatográfica

Tècnicas de separación cromatográfica

Michelle Cárdenas1  Juana Herrera2  Javier Quimbay2

Esta investigaciòn se realizó en la Universidad de La Salle de la ciudad de Bogotà D.C

Resumen

En esta práctica de laboratorio se pretende comprender la importancia que tienen los métodos de separación de mezclas. La cromatografía es utilizada para  separar elementos de una sustancia  en la cual los componentes son distribuidos entre dos fases, una  estacionaria, y  otra móvil. que se puede llevar a cabo por medio de la Cromatografía en papel,  en capa delgada,  intercambio iónico, gel-filtración, de afinidad y de gas.

Donde se tiene como objetivo separar los componentes de una mezcla de colorantes, reconocer su polaridad y su pureza mediante los distintos tipos de cromatografía.en este caso se utilizó separación mediante capa fina y columna de los que se obtuvo una clara separación y determinación de los compuestos presentes en la mezcla problema, por la diferencia de polaridad que presentaron ambos compuestos en capa fina;  y en columna la concentración que presenta la fracción obtenida de la CC es de 58.29ppm. Donde se concluyó que se evaluó la pureza del compuesto mediante cromatografía en capa fina, de acuerdo  a los  valores Rf en los cuales se evidencia una clara separación de cada sustancia debido a la reacción con el acetato-etilo  donde en la mezcla el compuesto más polar tiene distancia y el menos polar no se desplaza.

Palabras clave: Polaridad , absorbancia, cromatografía, fase móvil, fase estacionaria.

Abstract

In this laboratory practice is intended to understand the importance of the methods of separation of mixtures. Chromatography is a tool for the elimination of elements in a substance in which the components are distributed between two phases, one stationary, and another mobile. which can be carried out by means of paper, thin film, ion exchange, gel-filtration, affinity and gas chromatography.
Where the objective is to identify the components of a mixture of dyes, recognize their polarity and purity through the types of chromatography in this case you can find a thin layer and the column from which a clear separation and determination were obtained of the compounds present in the test mixture, by the polarity difference that the formula compounds in thin layer; and in the column the concentration that presents the fraction obtained from the CC of 58.29ppm. Where it was concluded that the purity of the compound was evaluated by chromatography in the thin layer, according to the values ​​found in the elements, a clear separation of each substance is evidenced, due to the reaction with ethyl acetate, where the mixture more polar compound has distance and the less polar does not move.

Key words: Polarity, absorbance, chromatography,  mobile phase, stationary phase.

Objetivos:

• Separar los componentes de una mezcla de colorantes usando cromatografía en columna
• Reconocer el efecto del cambio de polaridad de la fase móvil en la separación de una mezcla
• Cuantificar por espectrofotometría el primer colorante que salga de la columna
• Evaluar la pureza del compuesto mediante cromatografía en capa delgada

Introducción

En esta práctica de laboratorio se pretende comprender la importancia que tienen los métodos de separación de mezclas y conocer las diferentes maneras que existen de poder llevar a cabo una separación a partir de la cromatografía en capa delgada (CCD) y en columna (CC).

La cromatografía es una técnica de separación que se basa una fase estacionaria y una móvil (Harris, 2003). esta técnica permite la separación de componentes de una mezcla debido a la influencia de dos efectos contrapuestos:

Retención: Efecto producido sobre los componentes de una mezcla por una fase estacionaria, que puede ser un sólido o un líquido anclado a un soporte sólido.

Desplazamiento: Efecto ejercido sobre los componentes de la mezcla por una fase móvil, que puede ser un líquido o un gas.

La cromatografía es de suma importancia debido a su gran uso tanto en la industria como en el campo de la salud y la biología, por lo que se busca con esta práctica enseñar algunos tipos de cromatografía (como la de capa fina y columna). El objetivo principal de la practica fue la separacion e identificacion de los principales compuestos de una mezcla mediante la cromatografía.

Metodología

Fases de la cromatografía

Fase estática o estacionaria, la mezcla se coloca sobre un soporte fijo, por ejemplo papel. En esta fase tenemos ya la mezcla sobre un soporte, en nuestro ejemplo un papel.

Fase móvil, se hace mover otra sustancia sobre la mezcla que ya está sobre el soporte de la fase estática. En la fase móvil empezará el proceso de separación de los componentes de la mezcla al moverse a distintas velocidades por el líquido los distintos componentes de la mezcla sobre el papel.

Tipos de cromatografía

Cromatografía en capa delgada (CCD): La fase estacionaria consiste en una capa delgada de un adsorbente (como por ejemplo gel de sílice, alúmina o celulosa) depositada sobre un soporte plano como una placa de vidrio, o una lámina de aluminio o de plástico.

Cromatografía en columna: Es una técnica de purificación, puesto que permite aislar los compuestos deseados de una mezcla.

Cromatografía de intercambio iónico: Afinidad de los iones en solución por los sitios de polaridad opuesta que se encuentran en la fase estacionaria.

Cromatografía de exclusión: Habilidad de materiales de porosidad controlada para separar los componentes de una mezcla de acuerdo al tamaño y forma de las moléculas.

Cromatografía de afinidad: Especificidad de algunas macromoléculas biológicas. Éstas se unen a la fase estacionaria y para separar dicha macromolécula, bastará con variar el pH una vez que la columna esté limpia y sólo se encuentre de interés.

Cromatografía de adsorción: Diferencias en la afinidad relativa de los compuestos por el sólido utilizado como fase estacionaria. Las separaciones obtenidas se determinan por interacciones polares, siendo la fase estacionaria más polar que la fase móvil.

...