Informe Amilasa

Introducción

Las amilasa son encimas que catalizan las reacciones hidroliticas del almidón, dando origen a diversos productos que poseen una gran relevancia para algunas operaciones y proceso industriales. Las amilasas son comúnmente halladas en animales y plantas; sin embargo, para fines industriales, las más utilizadas son aquellas de origen bacteriano o fúngico. Las amilasas poseen una gran importancia en la producción de alimentos y biocombustibles.

Las α-amilasas presentan una gran utilidad tanto para la industria textil como para los alimentos pues rompen la molécula de almidón en fracciones más cortas (dextrinas). Actúan directamente sobre los enlaces α-1,4 de la molécula, dando origen a moléculas como la maltotriosa, maltotetraosa, maltopentaosa y maltohexaosa entre otras.

Objetivo general

Determinar la inactivación térmica e influencia del pH sobre la amilasa industrial por el método de difusión radial.

Objetivos específicos

• Comprobar el efecto y la acción de la amilasa sobre un medio de almidón.

• Determinar cómo influye el pH y la temperatura en dicho proceso.

• Identificar los productos de la acción de la amilasa sobre el almidón

Materiales

• Erlenmeyer

• Probeta

• Tubos de ensayo

• Cajas de Petri

• Pipetas

• Puntas para micro pipetas

• Gradillas para tubos de ensayo

Reactivos

• Almidon soluble

• Solución de HCl al 5%

• Solución de NaOH 5N

• Solución de CaCl2 al 30%

• Buffer de acetato pH 4,0

• Buffer de acetato pH 5,0

• Buffer de acetato pH 6,0

• Buffer de acetato pH 7,0

• Buffer de acetato pH 8,0

Equipos

• Balanza analítica

• pH metro

• micropipeta

• plancha de agitación

• baño maria

Procedimiento

Preparación del medio de reacción

• pesar 1gr de almidón soluble, en 1gr de phytagel y llevar a Erlenmeyer de 150ml, adicionar 30 ml de solución buffer correspondiente según el pH de reacción (4,5,6,7 y 8) y llevar a 100ml con agua destilada.

• Llevar la mezcla a ebullición durante 2min y adicionar 1 ml de solución de cloruro de calcio al 30% al momento de finalizar la ebullición. Agitar por 30 segundos

• Servir en cajas de Petri y dejar solidificar

• Realizar un agujero en el centro del medio solidificado con ayuda de un tubo

Efecto del tratamiento térmico

• Tomar 5 tubos de ensayo y adicionar 2ml de extracto enzimático a cada uno

• Llevar a baño de agua en ebullición y retirar un tubo exactamente al tiempo 0, 5, 10, 15, 20, 25 y transferir inmediatamente a baño de hielo

• Tomar 25uL del extracto térmicamente y depositar en el agujero de en medio de reacción preparado a los pH asignados.

• Llevar cada caja de Petri a una bolsa de plástico con cierre hermético e introducir un trozo de papel secante humedecido

• Llevar a horno de secado a 550C durante 24 horas

• Retirar la caja de Petri y dejar que tome temperatura ambiente

• Adicionar 1ml de solución de yodo, esparcir por toda la superficie y dejar en reposo de 15 minutos

• Retirar el exceso de yodo haciendo dos lavados con agua destilada

• Medir el diámetro de cada círculos sin color y calcular su área

Efectos del pH

• Tomar 25uL del extracto enzimático y depositar en el agujero de en medio de reacción preparado previamente a pH 4, 5, 6, 7, y 8

• Llevar cada caja de Petri a una bolsa de plástico con cierre hermético e introducir un trozo de papel secante humedecido

• Llevar a horno de secado a 550C durante 24 horas

• Retirar la caja de Petri y dejar

...