MICROSCOPÍA

Nombre:

Estructura y manejo del microscopio óptico.

Introducción

A medida que transcurren los años es mayor el número de médicos veterinarios que requieren del microscopio fotónico para desempeñar satisfactoriamente su trabajo. Por esto resulta conveniente que desde el primer año el discente se familiarice con el manejo de este instrumento. Diversos aspectos prácticos de materias como histología, microbiología, patología y parasitología se resuelven mediante el uso del microscopio.

Objetivos:

1. Manejar en forma adecuada un microscopio fotónico.

2. Identificar las partes ópticas, mecánicas y de iluminación de un microscopio fotónico.

3. Mencionar la función de los principales elementos de las partes mecánicas, ópticas y de iluminación de un microscopio fotónico.

4. Mencionar los procedimientos de rutina para el manejo del microscopio fotónico.

5. Enfocar y observar en forma adecuada una preparación histológica

Duración de la sesión: 2 horas.

Material:

Microscopio fotónico, preparaciones histológicas.

Descripción:

Por tal motivo, el conocimiento de todas sus partes los mismo que la manera como cada una de ellas contribuye a facilitar la observación, son de utilidad para la formación profesional. El microscopio fotónico está constituido por una parte mecánica, una parte óptica y una fuente de luz (Fig. 1)

Parte mecánica. Esta parte está constituida por una base, un brazo, un cabezal o cabeza, un revólver, una platina, dos tornillos: a) uno macrométrico y b) uno micrométrico, un porta condensador y una cremallera. La base o pie generalmente tiene forma de herradura, además de sostener todo el peso del microscopio, le da solidez y estabilidad al aparato. En un gran número de modelos de microscopios en esta parte se encuentra incorporada la fuente de luz. El brazo o columna sirve de asa para sujetar y transportar el microscopio. De preferencia, además de tomarlo con una mano del brazo o columna, es recomendable tomar la base con la otra. En la columna están contenidos los tornillos macrométrico y micrométrico que son los que elevan o descienden la platina, la cual se apoya a la columna. También en la columna se apoyan el soporte del condensador diafragma así como el tornillo y la cremallera que regulan su movimiento. La cabeza o cabezal se encuentra hacia el extremo superior del microscopio; tiene la forma de una media esfera, su función es servir de sostén al prisma de cristal que forma parte del sistema óptico del microscopio. Del cabezal parten hacia arriba los tubos donde se apoyan los lentes oculares, hacia abajo se encuentra el revólver porta objetivos.

Se denomina revólver al disco giratorio colocado en la superficie plana e inferior del cabezal y gracias al movimiento giratorio es posible cambiar el objetivo, cuando se desee este cambio es necesario hacerlo en dirección de las manecillas del reloj y con la yema de los dedos sobre el borde estriado del revólver. Se debe evitar tomar el objetivo para girar el revólver ya que con este tipo de manejo al cabo del tiempo el aparato se desajusta. El revólver se gira hasta sentir un tope sutil, que será fácilmente apreciado si el movimiento es lento y se realiza con la yema de los dedos. Cuando se aprecia este hecho tenemos la seguridad de tener el nuevo objetivo en posición adecuada para llevar a cabo la observación.

La platina es la porción del microscopio donde se coloca la preparación histológica para su observación y se localiza por debajo de los objetivos. Es una superficie plana de forma cuadrangular, a través de la cual pasa el haz de luz luminoso que atraviesa el corte histológico y permite su observación. En ocasiones los microscopios presentan un carro, se denomina así a una estructura que sujeta el portaobjetos por sus extremos mediante los tornillos que contiene hacia el borde lateral derecho de la platina, permite el movimiento de las preparaciones hacia adelante, atrás y hacia los lados.

De acuerdo a la marca o modelo de microscopio pueden encontrarse diferencias, sin embargo, en términos generales podemos decir que hay dos formas como los fabricantes de microscopios pueden resolver la construcción de los mismos. Unos prefieren colocar los tornillos macro y micrométricos en forma separada; otros en cambio, en un mismo accionador se presentan ambos; en estos casos y por lo general, el enfoque macrométrico se realiza con la perilla estriada de mayor diámetro, mientras que el enfoque micrométrico con la perilla estriada central más pequeña.

El tornillo macrométrico hace subir o bajar la platina y como regla siempre deberá enfocarse usando primeramente el tornillo macrométrico y con el objetivo de menor aumento. Cuando se procede de esta manera no es necesario usar el tornillo macrométrico cuando se cambia a otros lentes objetivos, solo es necesario hacer el enfoque fino con el micrométrico.

El porta condensador es una estructura que consta de un aro que sujeta al condensador y lo une al brazo o columna, sobre este aro se encuentra un tornillo que permite liberar el condensador y de esta forma poder hacer la adecuada limpieza o ajuste sobre el mismo, esto último deberá realizarse con cuidado de manera esporádica y sólo por personal entrenado para ello. La función del porta condensador es sostener el complejo condensador diafragma.

El tornillo para subir o bajar el porta condensador se encuentra por debajo y delante de los tornillos macro y micrométricos. El condensador (incluido o sostenido por el porta condensador) se sube y se baja con el objeto de que los haces luminosos coincidan exactamente con el objeto a observar y obtener así la mejor iluminación.

La cremallera es la placa de superficie dentada que se encuentra montada sobre la columna. A través de los dientes o engranes se articula tanto el soporte del condensador- diafragma como la platina.

Parte óptica. La parte óptica la constituyen en términos generales los lentes: oculares, objetivos, del condensador.

Oculares. Existen microscopios de un solo ocular, denominados monoculares; o bien los que presentan dos oculares denominados binoculares. En cualquier caso, los oculares se localizan en el extremo superior del cabezal y es en ellos donde se aplican los ojos del observador. Existen oculares de diferentes aumentos, éstos por lo general pueden ser de 10X, de 15X y de 20X. El signo de ―X‖ (por) se refiere a que el objeto observado, se ve tantas veces aumentado su tamaño original como lo indica el número que lo antecede.

Objetivos. Reciben este nombre por estar muy cerca del objeto a observar. Se localizan en la parte inferior del cabezal unidos a éste por medio del revólver, los objetivos reciben diversos nombres de acuerdo a los aumentos que tienen:

MICROSCOPIO OLYMPUS MICROSCOPIO ZEISS

1. Objetivo panorámico 4X 3, 2X

2. Seco débil 10X 10X

3. Seco fuerte 40X 40X

4. De inmersión 100X 100X

El objetivo proyecta una imagen aumentada en dirección del ocular. Los objetivos presentan en la porción metálica una serie de datos que a continuación se describen.

La lectura de los objetivos se hace de izquierda a derecha y de arriba hacia abajo. El primer número se refiere al aumento del objetivo; la siguiente cifra se refiere a la abertura numérica (AN), su determinación corresponde al fabricante y se refiere al menor índice de refracción correspondiente al lente del objetivo multiplicado por el seno del semiángulo de abertura. En este caso AN=1.25 (en el ejemplo de la derecha de la figura 2. En el renglón de debajo de la cifra (160) se refiere a la longitud en mm del tubo del microscopio en el cual deben ser utilizados (algunos en lugar de 160 tienen 170). La última cifra (0.17) que no todos los objetivos la tienen anotada y aparece en un tercer renglón, se refiere al espesor en mm del cubreobjetos que debe emplearse.

En los preparados histológicos esta medida es importante para evitar el estrellar la laminilla con el objetivo. Para evitar esto es recomendable tener el cuidado de siempre, colocar la laminilla con el cubreobjetos dirigido hacia arriba, ya que la medida antes citada está calculada para que la laminilla vaya de esta forma.

Es un hecho indudable que la calidad del microscopio viene dado esencialmente por la del objetivo, pues es éste el que produce la imagen aumentada del objeto y la calidad de ésta en cuanto a sus detalles estructurales y aspecto general no puede ser mejorada por los demás elementos.

Para clasificar y diferencias los objetivos algunos fabricantes utilizan el sistema de clasificación por medio de colores. Así un color suele corresponderse con un aumento dado.

Cuadro 1.

1. Objetivo panorámico Banda color café

2. Seco débil Banda color amarillo

3. Seco fuerte Banda color azul

4. De inmersión Banda color negro o blanco

a) Aumento nominal viene grabado en el cuerpo del objetivo y siempre se asocia con la longitud del tubo del microscopio (o la distancia entre el objetivo y el ocular), para los microscopios americanos la distancia es de 160mm y para los europeos, japoneses y rusos es de 170mm.

b) Aumento total: es el que se observa al mirar por el ocular. Para calcularlo basta multiplicar

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