Colorantes

La tinción o coloración es una técnica muy importante para la observación de microorganismos en los microscopios, pues mejora el contraste en la imagen vista en el microscopio; Los colorantes son sustancias que se fijan en otras sustancias y las dotan de color de manera estable o sustancia capaz de absorber determinadas longitudes de onda de espectro visible. En la microbiología para diferenciar de manera más explicita los microorganismos utilizan los colorantes diferenciales, que se componen de más de una sustancia tintórea; En algunas técnicas de coloración, las tinciones diferenciales más importantes que se emplean en bacteriología son las de Gram y la tinción ácido-resistente. Ambas tinciones se utilizan para obtener información acerca de la composición de las capas de la pared celular de las células bacterianas.

La tinción de Gram debe su nombre al bacteriólogo danés Christian Gram, que desarrolló la técnica en 1884. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana como para poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana, considerándose Bacteria Gram positiva a las bacterias que se visualizan de color moradas y Bacteria Gram negativa a las que se visualizan de color rosa o rojo.

La técnica de Gram consiste en teñir con el colorante azul de metileno al microorganismo, después fijarlo con yodo de Gram o Lugol este hace que el cristal violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la célula bacteriana, se le agrega una mezcle de alcohol-acetona la cual sirve para realizar la decoloración, ya que en la misma es soluble el complejo I2/cristal violeta. Una característica importante de esta técnica de coloración diferencial es que los organismos Gram positivos no se decoloran, mientras que los Gram negativos sí lo hacen; Para poder apreciar las células Gram negativas se utiliza una coloración de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina. Después de la coloración de contraste las células Gram negativas son rojas, mientras que las Gram positivas permanecen azules.

Un grupo auxocrómico son grupos o radicales positivos de átomos, que intensifican la acción de un grupo de átomos no saturados que, estando presentes en una molécula de una sustancia química, hacen que esta sea coloreada. Es decir son grupos cargados positivamente que intensifican una sustancia o cromóforo en la síntesis de colorantes; El cromóforo es la parte o conjunto de átomos de una molécula responsable de su color. También se puede definir como una sustancia que tiene muchos electrones capaces de absorber energía o luz visible, y excitarse para así emitir diversos colores, dependiendo de las longitudes de onda de la energía emitida por el cambio de nivel energético de los electrones, de estado excitado a estado fundamental o basal.

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