Determinación De Colesterol En Huevo

I. TÍTULO: DETERMINACIÓN DE COLESTEROL EN HUEVO

II. OBJETIVO:

Calcular el índice de peróxido de la muestra a partir de técnicas para la determinación enzimática cuantitativa de colesterol en alimentos.

III. INTRODUCCIÓN:

IV. PROCEDIMIENTO:

a)

V. RESULTADOS:

Datos experimentales:

Volumen(mL)

Blanco

Estándar

A1

A2

Sobrenadante

-

-

0.02

0.02

Estándar

-

0.02

-

-

Agua Destilada

0.02

-

-

-

Reactivo colesterol

2

2

2

2

Absorbancia

0

0.931

0.429

0.228

Utilizando la siguiente fórmula hallamos la concentración de colesterol para cada tubo:

Concentración del estándar: 2 g/L

Para A1:

Para A2:

Para hallar el colesterol total se utilizó la siguiente fórmula:

VI. DISCUSIÓN:

En la práctica realizada se obtuvo en total 1.411 g/L de colesterol en 1.5 gramos de yema de huevo. El aislamiento del colesterol de la yema se pudo determinar en primer lugar debido a lautilización de la acetona como disolvente. Se empleo acetona debido a que está puede realizar una extracción fraccionada de los lípidos que se encuentra en la yema de huevo, donde los lípidos menos polares (triacilglicéridos y colesterol) se pueden separar de los mas polares (fosfolípidos) gracias a la utilización de acetona como disolvente. Luego esta solución es llevada a la centrifugadora con el fin de separar el colesterol (sobrenadante) de los demás componentes de la yema de huevo. Después los 2 sobrenadantes que se obtuvo en las dos centrifugaciones pasan por un método enzimático, donde el reactivo de colesterol cumple con dicha función.En este método enzimático se utiliza una mezcla de enzimas acopladas constituida por colesterol esterasa, colesterol oxidasa y una peroxidasa. El colesterol esterasa hidroliza los ésteres de colesterol en colesterol libre, que es oxidado, junto a las moléculas de colesterol que ya estaban libres en la muestra biológica, a colestenona y peróxido de hidrógeno por colesterol oxidasa. Finalmente, un cromógeno (mezcla de 4-aminofenazona + fenol), por acción del peróxido de hidrógeno, en presencia de peroxidasa, se transforma en 4-(p-benzoquinona monoimino)-fenazona, un cromógeno activado, que tiene color y, por tanto, absorbe en la zona visible del espectro (máximo a 546 nm) por ello se Calibra el espectrofotómetro con el blanco a 505

nm ya que debe ser menor a 546nm. Cabe recalcar que en la primera centrifugación se obtuvo más colesterol ya que había más concentración de está en el sobrenadante, esto se puede comprobar con los valores de absorvancia obtenidos los cuales son g/L en el primer sobrenadante extraído y g/L en el segundo sobrenadante extraído. Para finalizar se sabe que Los métodos analíticos para la determinación del colesterol se dividen en colorimétricos y enzimáticos, en la práctica se empleo el método enzimático para evita el problema de las variaciones típicas del método de Liebermann-Burchard, consecuencia de la diferencia de color producidos por los ésteres de colesterol y el colesterol libre.

VII. CONCLUSIONES:

Se pudo determinar la concentración del colesterol en la yema de huevo por medio del método analítico enzimático.

La mayor o menor concentración de colesterol en el sobrenadante obtenido se puede saber a partir de los resultados obtenido en el espectrofotómetro calibrado a 505nm.

Se obtuvo total 1.411 g/L de colesterol en 1.5 gramos de yema de huevo.

El método analítico enzimático es un método

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