Determinacion De Colesterol Serico

Introducción:

Las clases principales de lípidos en sangre son los ácidos grasos, el colesterol, los triglicéridos, los fosfolípidos y las lipoproteínas. La hiperlipidemia no es solo una aberración y hay un número de distintos estados hiperlipidemicos. Las pruebas de perfiles lipídicos incluyen las mediciones de colesterol, triglicéridos, fosfolípidos y la determinación de los fenotipos lipoproteicos (Gennaro, 2003).

Imagen 1. Estructura del colesterol

El colesterol, una molécula esterol, es una sustancia esencial para la síntesis de hormonas esteroides por la cortea suprarrenal y para la producción de ácidos biliares en el hígado. Existe en la sangre como esterol libre y como esteroles del colesterol de ácidos grasos (Gennaro, 2003).

En la determinación de colesterol total se extra del suero con una mezcla de alcohol-éter y el colesterol se estima por métodos colorimétricos después de la reacción con el reactivo anhídrido acético- ácido sulfúrico (reacción de Liebermann-Burchard). La precipitación de colesterol libre con digitonina diferenciara el colesterol libre del colesterol esterificado. También se utiliza la separación cromatografía del colesterol de sus esteres en columnas de alúmina, acido silícico o silicato de magnesio con solventes orgánicos (Gennaro, 2003).

El nivel serico normal de colesterol total en el adulto es de 150 a 270 mg/dL; este nivel se encuentra aumentado en la hiperlipidemia, específicamente en la híper-β-lipoproteinemia; la nefrosis, la diabetes mellitus y el mixedema, y disminuye en el hipertiroidismo y la enfermedad hepática. El colesterol libre comprende del 20 al 40% del colesterol total en suero, y la fracción esterificada del 60 al 80% restante (Gennaro, 2003).

Existen dos tipos de métodos para la determinación del colesterol: los químicos y los enzimáticos. Los rimeros se basan en la clásica reacción de Lieberman-Burchard y posterior medición colorimétrica. Estos métodos han quedado obsoletos y abandonados por su imprecisión, inexactitud, complejidad y frecuentes interferencias analíticas.

Los métodos enzimáticos se basan en el empleo de la enzima colesterol esterasa que hidroliza los esteres de colesterol, y el colesterol libre es substrato de la enzima colesterol oxidasa, que oxida específicamente el colesterol según la siguiente reacción:

Colesterol  Colestenona + H2O

Determinándose a continuación el agua oxigenada liberada mediante unas reacciones enzimáticas auxiliares. Entre ellas las más difundidas son las que emplean la peroxidasa y el sistema cromogenico fenol-antipirina.

Objetivos: Determinar la concentración de colesterol en suero

Materiales y sustancias:

Materiales:

Tubos de ensaye

Tubos para espectrofotómetro

Centrifuga

Espectrofotómetro

Pipetas

Propipetas

Gradilla

Vacutainer

Aguja

Torundas

Tubo con EDTA

Sustancias:

Alcohol

Agua destilada

Reactivo de colesterol

Ácido sulfúrico [ ]

Metodología:

Se tomó una muestra de sangre en un tubo con EDTA que luego se centrifugo por 5 minutos a 2500 rmp para luego utilizarlo como se muestra en la tabla 1. Colocándolos en tubos de ensaye

Reactivos Problema Patrón Blanco

Suero hemolizado 0.05 ml ----- -----

Solución Patrón ----- 0.05 ml -----

Agua destilada ----- ----- 0.05 ml

Reactivo

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