Fosfatasa Al.

Fosfatasa alcalina

Patologías

Los niveles aumentados de Fosfatasa Alcalina pueden indicar:

• Alcoholismo
• Anemia
• Cáncer de huesos
• Cáncer de próstata
• Colestasis (obstrucción de vía biliar)
• Curación de fracturas óseas
• Enfermedades de los huesos
• Enfermedades del hígado
• Enfermedades renales
• Enfermedad de Paget
• Hepatitis
• Hiperparatiroidismo
• Leucemia
• Osteomalacia
• Prostatitis

Los niveles disminuidos de Fosfatasa Alcalina pueden indicar:

• Malnutrición
• Deficiencia de proteínas

Técnica

• Fundamentos del método:

La fosfatasa alcalina (ALPo monoester ortofosforico fosfohidrolasa) hidroliza al                          p-nitrofenilfosfato (p-NFF) que es incoloro, produciendo fosfato y p-nitrofenol a pH alcalino. La velocidad de aparición del anión p-nitrofenolato (amarillo) a 405 nm, es proporcional a la actividad enzimática de la muestra.

• Reactivos provistos:

1. Reactivo A: solución de buffer DEA (dietalonamina) contenido de sales de magnesio
2.  Reactivo B: solución contenido p-nitrofenil fosfato (p-NFF)

Concentraciones finales

DEA……………………………………………1.0 mol/l

Mg……………………………………………..0.5 mmol/l

p-NFF…………………………………………1.0 mmol/l

• Material requerido:

• Espectofotometro
• Micropipetas y pipetas para medir los volúmenes indicados.
• Cubetas espectofotometricas de caras paralelas
• Baño de agua a la temperatura de reacción seleccionada
• Cronometro

• Condiciones de reacción:

• Longitud de onda: 405 nm
• Temperatura de reacción: 20, 30 o 37°C
• Tiempo de reacción: 3 minutos y 20 segundos
• Volumen de muestra: 10ul

• Procedimiento 1:

Técnica con reactivo único

1. En una cubeta mantenida a temperatura de reacción seleccionada colocar:

• Reactivo único……………………………….. 1.0 ml
• Pre incubar unos minutos. Luego agregar:
• Muestra…………………………………………. 10 ul

1. Mezclar simultáneamente y disparar simultáneamente el cronometro.
2. Esperar 20 segundos y leer la absorbancia inicial.
3. Registrar la absorbancia luego de 1, 2 y3 minutos de la primera lectura.
4. Determinar la diferencia promedio de la absorbancia/min restando cada lectura de la anterior y promediando los valores. Utilizar este procedimiento para los cálculos.

• Calculo de los resultados:

    A/ min x 5.460= Fosfatasa alcalina (U/l)[pic 1]

• Procedimiento 2:

Técnica con reactivos separados

1. En una cubeta mantenida a temperatura de reacción seleccionada colocar:

• Reactivo A………………………………………… 1.0 ml
• Muestra………………………………………….… 10 ul
• Pre incubar unos minutos. Luego agregar:
• Reactivo B……………………………………….. 0.25 ml

1. Mezclar simultáneamente y disparar simultáneamente el cronometro.
2. Esperar 20 segundos y leer la absorbancia inicial.
3. Registrar la absorbancia luego de 1, 2 y3 minutos de la primera lectura.
4. Determinar la diferencia promedio de la absorbancia/min restando cada lectura de la anterior y promediando los valores. Utilizar este procedimiento para los cálculos.

• Calculo de los resultados:

    A/ min x 6.812= Fosfatasa alcalina (U/l)[pic 2]

Valores de referencia

Observaciones

En base a la practica realizada ene l laboratorio, las observaciones principales que se realizarn fuern sobre el cambio de color en las soluciones de acuerdo al contenido de la misma. El cambio de tonalidad no fue prominente, ya que el color que se obtuvo fue el siguiente:

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