IDENTIFICA MICROORGANISMOS CON BASE EN NICAS BACTERIOLÓGICAS

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MANUAL DE PRÁCTICAS

“IDENTIFICA MICROORGANISMOS CON BASE EN

TÉCNICAS BACTERIOLÓGICAS”

ELABORADO POR[pic 3]

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I N D I C E

PRÁCTICA  No. 1

TINCION DE ESTRUCTURAS BACTERIANAS

(TECNICA DE GRAM Y DE SHEAFFER-FULTON)

NOMBRE DEL ALUMNO__________________________________________ GRUPO_____________

FECHA DE LA  REALIZACIÓN_______________________ FIRMA DEL MAESTRO_______________

1. OBJETIVO

AL FINALIZAR LA PRÁCTICA, LOS ALUMNOS DOMINARÁN LA TÉCNICA DE TINCIÓN DE ESPORAS Y LA TINCION DE GRAM, ASÍ COMO LA MANERA DE ENFOCAR LAS ESTRUCTURAS BACTERIANAS Y DIFERENCIARLAS EN EL FROTIS.

2. MATERIAL Y REACTIVOS

MATERIAL                                                REACTIVOS

2 ASAS BACTERIOLÓGICAS                                        REACTIVOS PARA TINCIÓN DE:

2 MECHEROS                                                                SHEAFFER - FULTON

1 HISOPO ESTERIL                                                         GRAM

1 VASO DE PRECIPITADO                                                

14 PORTAOBJETOS                                                AGUA DESTILADA

1 PARRILLA ELÉCTRICA                                

   PIPETAS PARA LOS COLORANTES                                    

1 PORTATINCIONES                                                    

2 MICROSCOPIOS COMPUESTOS CON  100X                        

1 BOLSA PARA RESIDUOS SÓLIDOS INFECTO-CONTAGIOSOS

MUESTRA BIOLÓGICA

HECES FECALES DE CABALLO

MUESTRA DE CULTIVO

3. PROCEDIMIENTO

TINCION DE SHAEFFER-FULTON

1. COLOCAR UN POCO DE LAS HECES DE CABALLO EN EL VASO DE PRECIPITADO,  AGREGAR APROXIMADAMENTE 100 mL DE AGUA DESTILADA Y COLOCARLO EN LA PARRILA ELECTRICA HASTA EBULLICIÓN.
2. DEJAR QUE LA MEZCLA HIERVA POR APROXIMADAMENTE 30 min. DEJAR ENFRIAR UN POCO.
3. TOMAR CON EL CIRCULO DEL ASA BACTERIOLÓGICA UN POCO DEL SOBRENADANTE DEL VASO DE PRECIPITADO Y EXTENDERLO EN EL CENTRO DE UN PORTAOBJETO.   DEJAR SECAR.
4. ENCENDER LOS MECHEROS Y PASAR EL FROTIS SOBRE LA LLAMA PARA FIJARLO.
5. TEÑIR CON LA TINCION DE SHAEFFER-FULTON.

TINCION DE GRAM

TINCION DE GRAM

1. HACER FROTIS DE CADA BACTERIA Y FIJARLOS CON CALOR.
2. CUBRIR LOS FROTIS CON CRISTAL VIOLETA Y DEJARLO ACTUAR DURANTE 1 min ESCURRIR EL COLORANTE Y LAVAR CON CHORRO SUAVE DE AGUA.
3. CUBRIR CON SOLUCION DE LUGOL Y DEJARLO ACTUAR DURANTE 1 min ESCURRIR EL REACTIVO Y LAVAR CON CHORRO SUAVE DE AGUA.
4. COLOCAR EL FROTIS EN FORMA VERTICAL Y USANDO UN FONDO BLANCO, DECOLORAR AÑADIENDO GOTA A GOTA LA SOLUCIÓN DE ALCOHOL-ACETONA DE 5 A 15 SEGUNDOS. EL MOMENTO EXACTO PARA TERMINAR LA DECOLORACIÓN ES CUANDO DEJAN DE FLUIR “HILOS DE COLORANTE” POR EL FROTIS. ESTE ES EL PASO CRITICO DE LA TINCIÓN. LAVAR INMEDIATAMENTE CON UN CHORRO SUAVE DE AGUA.
5. CUBRIR EL FROTIS CON SAFRANINA Y DEJARLA ACTUAR DURANTE 1 min ESCURRIR EL COLORANTE Y LAVAR CON UN CHORRO SUAVE DE AGUA. DEJAR SECAR AL AIRE.
6. OBSERVAR LA PREPARACIÓN AL MICROSCOPIOCON OBJETIVO DE INMERSIÓN

1. TECNICA DE TINCION DE GRAM POR PASOS

1. HACER CUATRO FROTIS CON UNA MEZCLA DE BACTERIAS Y FIJARLOS AL CALOR.
2. INICIAR LA TINCIÓN DE GRAM Y SEPARAR UN FROTIS DESPUÉS DE CADA UNO DE LOS PASOS DE LA TECNICA.
3. OBSERVAR AL MICROSCOPIO CON EL OBJETIVO DE INMERSIÓN.

1. INFLUENCIA DEL TIEMPO DE DECOLORACION EN LA TECNICA DE GRAM

1. HACER DOS FROTIS CON UNA MEZCLA DE BACTERIAS.
2. TEÑIR LOS FROTIS CON LA TINCIÓN DE GRAM DEJANDO ACTUAR LA SOLUCIÓN DE ALCOHOL-ACETONA 3 SEGUNDOS EN UNO Y 3 MINUTOS EN EL OTRO.
3. TERMINAR TINCIÓN.
4. OBSERVAR AL MICROSCOPIO CON EL OBJETIVO DE INMERSIÓN.

4. ESQUEMA DEL PROCEDIMIENTO

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