LABORATORIO N° 5.
Enviado por Tefy09 • 31 de Mayo de 2016 • Informes • 910 Palabras (4 Páginas) • 382 Visitas
“Funcionamiento de la cadena respiratoria”
- OBJETIVO
Demostrar el funcionamiento de la cadena respiratoria a través del efecto de inhibidores sobre la cadena oxido – reducción biológica.
- GENERALIDADES
Se ha demostrado que muchas sustancias inhiben la cadena respiratoria en mitocondrias aisladas, células intactas y tejidos, produciendo en consecuencia deficiente respiración celular y deficiente oxidación de los sustratos. Algunos antibióticos como la antimicina A, la elaborada por un Streptomyces, inhiben la cadena respiratoria en, o cerca del sitio II. Algunos barbitúricos como el amital y el seconal inhibirán la NADH2.
El cianuro, la azida sódica (NaN3) y el CO pueden inactivar en forma eficaz la citocromo oxidasa.
El estudio de estos inhibidores es importante porque permite comprender la causa de la toxicidad de estos compuestos y también porque contribuyen a la realización de trabajos de investigación relacionados con la estructura y función de la cadena respiratoria.
En el presente trabajo se trata de demostrar el efecto de la oxido reducción empleando como fuente enzimática el homogenizado celular de hígado.
- MATERIALES y REACTIVOS
Materiales
- Mortero
- Gasa
- Tubos 16 x 16
- Pipetas de 1 mL
- Placa Petri
- Bisturí
- Bagueta
- Gradilla
Reactivos
- Agua Helada
- Tejido Hígado de res o de pollo
- Buffer fosfato de sodio 0.1M pH 7,4
- 2.6 diclorofenolindofenol 0.02%
- P-fenilondiamina 1%
- Succionato 0.1 M
- Barbiturato de sodio 0.1 M
- Cianuro de Sodio 0.1 M
- Malonato 0.1 M
- PROCEDIMIENTO
Obtener 100 gr. De tejido hígado de res.
- Eliminar completamente de la grasa y el tejido conectivo.
- Colocarlo en un mortero de porcelana y tributario.
- Agregar 10 mL. de agua helada.
- Agitar continuamente durante 15minutos utilizando el moledor del mortero.
- Tamizar a través de una gasa fina para eliminar el líquido.
- Repetir el lavado x 2 veces, para eliminar al máximo los sustratos naturales y el DPN.
- Transferir el tejido lavado a una licuadora.
- Agregar el volumen igual de Buffer Fosfato y mezclar lo mejor posible.
- Refrigerar o colocar en un recipiente con hielo para evitar el detrioro de las enzimas.
- Agitar enérgicamente para favorecer la difusión del oxígeno.
- Dejar reposar 30 minutos, agitando continuamente.
- Observar la progresión de las reacciones y el comportamiento de cada uno de los sistemas.
- SISTEMA SUCCINATO:
COMPONENTES | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| 1.5 | 1.2 | 1.0 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
| 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
| 0.2 | -- | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
| -- | -- | -- | 0.5 | -- | -- |
| -- | -- | -- | -- | 0.5 | -- |
| -- | -- | -- | -- | -- | 0.5 |
| -- | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
- Mezclar: Dejar en reposo a temperatura ambiental.
- Observar: Constantemente los cambios de color del indicador.
- Interpretar sus resultados.
- SISTEMA USANDO P – FENILENDIAMINA:
COMPONENTES | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| 0.2 | 1.5 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
| -- | -- | -- | 0.5 | -- | -- |
| -- | -- | -- | 0.5 | -- | |
| -- | -- | -- | -- | -- | 0.5 |
| 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
| -- | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
- Mezclar: Dejar en reposo a temperatura ambiental.
- Observar: Constantemente los cambios de color del indicador.
- Interpretar sus resultados.
- CUESTIONARIO
- ¿Qué interpretación le da a los tubos 1, 2, 3, 4, 5 y 6 del primer experimento?
Sistema succinato.-
COMPONENTES | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| 1.5 | 1.2 | 1.0 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
| 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
| 0.2 | -- | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
| -- | -- | -- | 0.5 | -- | -- |
| -- | -- | -- | -- | 0.5 | -- |
| -- | -- | -- | -- | -- | 0.5 |
| -- | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
RESULTADO | - | - | + | - | - | + |
(-): La solución no es de color azul. (+): La solución es de color azul
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