Práctica cámara de neubauer.

Universidad Nacional Autónoma de México[pic 1][pic 2]

Facultad de Ciencias

Biología Molecular de la Célula 3

Sesión de laboratorio #4.

: HEMOCITÓMETRO O CÁMARA DE NEUBAUER                                                                                                        Pérez Rivera Aldo Emmanuel.

Introducción.

El conteo de células es un método muy utilizado para determinar la concentración de células en el plasma sanguíneo, o en una muestra de líneas celulares, de espermatozoides en pruebas relacionadas a la fecundidad o algún otro propósito, es necesario contar el número de células viables que además de arrojar un número nos permita ver características morfológicas y su viabilidad.

Para poder contabilizar las células hay métodos electrónicos, pero aun así el más utilizado en la actualidad es la cámara de Neubauer que es un portaobjetos con un grosor superior, que en la parte central tiene grabada una rejilla cuadrangular que tiene dos zonas de conteo donde en cada uno se divide en 9 cuadros, el cuadrante central está divido en 25 cuadrante y los de las esquinas se encuentran divididos en cuadrante de 16, permitiéndonos así un conteo facilitado conjugado con el uso de diluciones, es por esta simplicidad que es el método más utilizado.

Objetivos. Realizar un conteo celular con el uso correcto de una cámara de Neubauer (hemocitómetro). Conocer como se realizan los cálculos necesarios para estimar el número celular de una suspensión celular en distintas diluciones.

Material.

Microscopio de campo claro

Cámara de Neubauer

Cubreobjetos

Micropipeta de 200µL

Agua destilada

Métodos.

1.Se nos proporcionaron 5 diferentes tubos eppendorf con las letras de A-E, donde A es la muestra original y la concentración es de 10mg/ml de una muestra de levadura y los siguientes tubos se hicieron diluciones seriales tomando 100 µL del tubo anterior más agua destilada9

2.Se tomaba una muestra de 20 µL de las muestras viables (D-E)

3. El volumen tomado se deposita en la cámara de Neubauer con el cubreobjetos puesto y por capilaridad la muestra se extenderá sobre el área de conteo.

4.Se coloca la cámara en el microscopio de campo claro y se hace Iluminación Kohler con el objetivo de 10x.

5. En este objetivo se procede a hacer el conteo de células en las cuadrantes esquinas y el central, evitando contar las células que se encuentren en posición problemáticas como las líneas con otros cuadrantes.

Resultados y observaciones:

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Tubo C conteo

Central-210; Izquierdo superior-244; Izquierdo inferior-219; Derecho superior-255;Derecho inferior-232. Promedio=233

Tubo D conteo

Central-23; Izquierdo superior-28; Izquierdo inferior-21; Derecho superior-24;Derecho inferior-31. Promedio=24.8

Tubo E conteo

Central-4; Izquierdo superior-1; Izquierdo inferior-3; Derecho superior-2;Derecho inferior-2. Promedio=2.6

Discusión de resultados.

En concentraciones óptimas para poder hacer un conteo es el tubo c debido a que aquí presenta un alto número de células pero es posible contarlo y hacer un mejor conteo, ya que como baja la dilución el promedio se vuelve más susceptible al número de células reales respecto a los ml, también vemos que en los tubos tanto Ay B la concentración es tan alta que no se nos permite ver el número de células por las aglomeraciones que estas se hacen sobre sí mismas y también es bueno notar que no se tomaron en cuenta las células que se encontraban en posiciones dificultosas para evitar contarles dos veces.

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