Rosa De Bengala

Rosa de Bengala

Determinación de anticuerpos anti-Brucela

F U N D A M E N T O

La prueba del Rosa Bengala o prueba del antígeno tamponado de Brucela, es una técnica rápida de aglutinación en porta para la detección de anticuerpos anti-Brucela en sueros animales y humanos1-3. La suspensión bacteriana es reactiva tanto con anticuerpos IgG como IgM, siendo los primeros detectados más precozmente (infecciones sub-clínicas) y por un período más largo de tiempo (fase crónica) que con el procedimiento convencional de tubo.

La determinación se efectúa ensayando la suspensión tamponada (pH 3,6) de Brucella coloreada con Rosa Bengala frente a los sueros problema. La presencia o ausencia de aglutinación visible es indicativa de la presencia o ausencia de anticuerpos en las muestras ensayadas.

COMPOSICIÓN DE LOS REACTIVOS

Rosa Bengala. Suspensión bacteriana de B. abortus, tamponada a pH 3,6 y coloreada con Rosa Bengala. T+, Xi, C R: 24/25-34-35

POSITIVO: Brucella. Suero animal anti-Brucella con una actividad aglutinante superior a 100 UI/mL.

NEGATIVO: Suero animal con una actividad aglutinante inferior a 10 UI/mL.

Aviso: Los reactivos de este kit contienen 0,95 g/L de azida sódica. Evitar el contacto con la piel y mucosas.

ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD

Conservar a 2-8oC. No congelar los componentes del kit ya que podría verse afectada la funcionalidad del test. El Antígeno y los Controles son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.

PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS

El Antígeno y los Controles están listos para su uso.

MUESTRAS

Suero claro, reciente. Una vez separado, el suero puede guardarse a 2-8oC durante una semana antes del ensayo, o por un período mayor a –20oC.

EQUIPO ADICIONAL

− Pipetas de volumen variable.

−Agitador mecánico rotatorio de velocidad regulable a 100 r.p.m.

− Cronómetro.

T É C N I C A

1. Equilibrar reactivos y muestras a temperatura ambiente.

2. Resuspender el antígeno con suavidad. Aspirar y vaciar varias veces el cuentagotas para asegurar su homogeneidad antes del ensayo.

3. Depositar 1 gota (50 μL) de suero problema en uno de los círculos de la tarjeta visualizadora. En círculos adicionales, depositar 1 gota de control positivo y 1 gota de control negativo.

4. Añadir a cada círculo 1 gota de reactivo Rosa Bengala, próxima a la muestra a analizar.

5. Efectuar la mezcla con ayuda de un palillo desechable, extendiéndola de forma que cubra por completo la superficie interior de cada anillo. Emplear palillos distintos para cada mezcla.

6. Mover la tarjeta a mano o con agitador rotatorio (100 r.p.m.) durante 4 minutos.

7. Observar de inmediato con la ayuda de una luz adecuada, la aparición de cualquier signo de aglutinación.

Lectura

Reacción negativa: Suspensión uniforme sin cambio visible alguno, tal como se presenta en el control negativo.

Reacción positiva: Aglutinación débil o intensa, fácilmente visible macroscópicamente. Efectuar pruebas adicionales para confirmar la situación.

RESULTADO:

No aglutinación. Negativo a Brucelosis.

CONTROL DE CALIDAD

Incluir diariamente controles positivo y negativo para confirmar el correcto funcionamiento del reactivo, siguiendo los pasos descritos para la Prueba cualitativa. El control positivo debe producir una clara aglutinación. Si no se obtiene el resultado esperado, no utilice el kit.

VALORES ESPERADOS

Como valor de orientación se considera internacionalmente 25 UI/mL como límite superior del margen de normalidad. Como los valores de referencia están sometidos a la influencia de numerosos factores que pueden variar en cada grupo analizado, cada laboratorio debe determinar su

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