SIEMBRA Y MÉTODOS DE AISLAMIENTO

OBJETIVOS:

I. Proporcionar los medios adecuados para que el alumno trabaje en condiciones de esterilidad.

II. Manejar el material que se empleará en la siembra e inoculación de cepas microbianas.

III. Saber llevar a cabo los diferentes métodos utilizados en siembra e inoculaciones.

IV. Explicar los diferentes tipos de siembras que pueden realizarse.

II INTRODUCCIÓN:

El estudio de las diferentes especies microbianas exige como requisito previo poder cultivarlos en condiciones de Laboratorio. Las bacterias presentan diversos comportamientos en las reacciones de acuerdo a las condiciones físicas del ambiente y las exigencias nutritivas; por esta razón, conviene conocer las características del cultivo de las especies y en segundo lugar la apariencia y manifestaciones particulares en los medios proporcionados, mediante las cuales se puede reconocer ciertas bacterias y pueden servir de ayuda para la identificación de la especie.

Existen diversos procedimientos y tipos de equipo que se emplean en el laboratorio para el aislamiento, el cultivo y la identificación de los microorganismos. Puesto que se requieren cultivos puros para determinar las actividades biológicas y bioquímicas de los microorganismos (bacterias) se debe conservar la pureza de los cultivos y evitar la contaminación. Asimismo es necesario dominar el uso del asa y la aguja de inocular, al igual que las técnicas apropiadas.

Una vez obtenidos los cultivos puros se puede intentar la identificación de los cultivos bacterianos, este procedimiento implica a menudo la observación de las características mediante diferentes pruebas.

III PARTE EXPERIMENTAL:

1. MATERIALES Y EQUIPOS

- Placa Petri con bacterias.

- Asas y agujas de Kolle.

- Asa de Digrasky.

- Placas de Petri (100 x 15 mm) con medio PDA, Mac Conkey, EMB, Manitol salado.

- Tubos con medios diferenciales, LIA, TSI, CS.

- Agua destilada.

- Algodón.

- Mechero + alcohol.

2. DESARROLLO

- Aislar diferentes microorganismos mediante los siguientes métodos:

Métodos de Inoculación o Siembra (Métodos de Aislamiento)

1. Siembra del Inóculo en medio Líquido:

2. Siembra del Inóculo en medio Sólido:

a) Técnica de Barry: En el medio de cultivo previamente fundido de 20-25ml a una Tº 45-50ºC en tubo se adicionará la cantidad de inóculo que oscila entre 0.1 a 0.4, homogenizar y plaquear.

b) Siembra de muestra líquida con Asa Digrasky: Consiste en adicionar al medio sólido un inóculo que puede oscilar entre 0.2 – 1ml con pipeta graduada y estéril y posteriormente se extiende con el asa de Digrasky también estéril.

c) Siembra por agotamiento o aislamiento en estría: Se toma con el asa de siembra previamente esterilizada una cantidad adecuada de muestra problema depositando el inóculo en unos de los extremos superiores de la palca, a partir de ahí se realizarán movimientos en zig – zag de un extremo al otro de la placa sin levantar el asa hasta concluir la siembra.

d) Siembra por agotamiento: “Aislamiento en estría múltiple”, se toma la muestra problema con el asa previamente estéril y dicho inóculo, se depositará en el extremo superior de la placa extendiéndose de un extremo al otro de este sólo en la parte superior. Flameamos el asa y giramos ligeramente dicha placa repitiendo el proceso anterior que nos permitirá arrastrar la muestra desde uno de los bordes donde quedó la muestra hasta el otro extremo superior de la placa.

e) Técnica de los 4 cuadrantes: Rotular en la placa de vidrio, dibujar 2 líneas perpendiculares que deberán cruzarse en el centro de la placa de tal forma que esta quede dividido en 4 cuadrantes iguales.

Se tomará con el asa de siembra estéril una cantidad de inóculo y se adicionará en el extremo superior de uno de los cuadrantes extendiéndose por todo ese cuadrante en zig – zag.

f) Técnica de 3 giros: Se rotula la placa en forma análoga. Se toma el inóculo con el asa y se siembra por estría la mitad superior de la placa.

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