Subcultivo Microbiano

INFORME DE MICROBIOLOGÍA GENERAL

TEMA

Subcultivo Microbiano

OBJETIVOS:

• Aprender a sembrar en tubos con agar Inclinado de adentro hacia fuera en forma de zig-zag.

• Realizar un subcultivo para obtener una reproducción microbiana de una colonia determinada.

• Aprender a preparar las cuñas de agar.

INTRODUCCIÓN

Sembrar es el acto de colocar el material bacteriológico en el medio de cultivo para promover su crecimiento y desarrollo, y subsiguiente multiplicación. El resultado de una siembra se llama Cultivo.

Las siembras pueden ser:

- Primarias: cuando el material es inoculado en los medios por primera vez

- Secundarias: cuando el material a inocular procede de una siembra primaria

Las reglas fundamentales para efectuar la siembra exigen:

• Que se efectúen asépticamente

• Que los medios de cultivo y el instrumental a utilizar estén esterilizados

• Que se realicen solo los manipuleos indispensables

• Que se trabaje fuera de toda corriente de aire. De ser posible utilizando un mechero o bien Flujo laminar.

La forma de sembrar y cultivar los microorganismos depende del tipo de microorganismo y propósito específico del estudio.

Subcultivo seriado.

Consiste en resembrar el microorganismo cada cierto tiempo en un medio adecuado; generalmente se utiliza agar inclinado ya que en medio sólido se detectan mejor los contaminantes que en medio líquido y el hacerlo inclinado tiene por objeto el evitar la desecación rápida del medio.

Este método es válido para cortos períodos de tiempo (semana - 15 días) por lo que deben ser resembrados con frecuencia lo que incrementa el riesgo de contaminación. Además, al mantenerlos a temperatura ambiente, pueden crecer y espontáneamente cambiar sus características genéticas (mutación, pérdida de plásmidos, etc.) que pueden afectar al carácter por el que fueron seleccionados. Estos dos inconvenientes pueden subsanarse en parte enlenteciendo el metabolismo de los microorganismos al mantenerlos a 4°C con lo que su crecimiento es inferior y la necesidad de hacer subcultivos se prolonga a 1 - 3 meses. En microbiología industrial hay que pensar en mantener las colecciones durante períodos de años y no de meses, por lo tanto se utilizan otras técnicas que nos ahorran trabajo y disminuyen los riesgos.

MATERIALES

• Cultivo primario

• asas de cultivo

• cápsulas de Petri

• tubos de ensayo

• Papel secante

• Mechero

Reactivos

• Agar plate count

PROCEDIMIENTO

Preparación de cuñas de agar

Se realiza la dilución del agar y se lo lleva a esterilización el tiempo establecido.

Se coloca 10 ml de agar en los tubos previamente esterilizados, con su respectivo tapón.

Se deja secar el agar por 10 minutos aproximadamente habiéndolos dejado inclinados previamente.

Se debe desinfectar previamente la zona de trabajo

Se procede a someter a calor el asa de siembra hasta que esté al rojo vivo

Luego se dejara enfriar porción breves segundos, con ayuda del asa de siembra sí tomara una pequeña muestra un sembrar. se debe flamear el pico del tubo donde sí va a depositar la sustancia un sembrar. de inmediato sí introducir el asa de siembra con la muestra dentro del tubo, sí debe introducir el asa primero al fondo, y realizar el zig-zag hacia afuera.

RESULTADOS

Se obtuvo una siembra exitosa donde se puede observar que se llevo a cabo los pasos indicados por el docente.

CONCLUSIONES

• Se utiliza agar inclinado ya que en medio sólido se detectan mejor los

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