Informe de cromatografia en columna

Introducción

La cromatografía es una técnica que permite la separación de los componentes de una mezcla debido a la influencia de dos efectos contrapuestos.

a) Retención. Efecto producido sobre los componentes de la mezcla por una fase estacionaria, que puede ser un sólido o un líquido anclado a un soporte sólido.

b) Desplazamiento. Efecto ejercido sobre los componentes de la mezcla por una fase móvil, que puede ser un líquido o un gas.

El fenómeno de migración de los componentes de una mezcla a lo largo de la fase estacionaria, impulsados por la fase móvil, recibe el nombre de elución. La mezcla a separar se deposita sobre la fase estacionaria, mientras que la móvil atraviesa el sistema desplazando a los componentes de la mezcla a distinta velocidad, dependiendo de la magnitud de sus interacciones relativas con ambas fases. Las dos fases se eligen de forma que los componentes de la muestra se distribuyen de modo distinto entre la fase móvil y la fase estacionaria. Aquellos componentes que son fuertemente retenidos por la fase estacionaria se mueven lentamente con el flujo de la fase móvil; por el contrario los componentes que se unen débilmente a la fase estacionaria, se mueven con rapidez. Como consecuencia de la distinta movilidad, los componentes de la muestra se separan en bandas o zonas discretas que pueden analizarse cualitativa y/o cuantitativamente.

En la cromatografía en columna, la mezcla se introduce en una columna de material sólido generalmente gel de sílice, aunque también puede ser alúmina, y luego un solvente o una mezcla de ellos (eluyente) es pasado a través de la columna para separar el producto deseado de sus impurezas. El eluyente puede pasar por gravedad o ejerciendo presión con una bomba de aire. Este último tipo se denomina cromatografía flash. (Araya, 2019)

Materiales

• Pipeta pasteur
• soporte universal
• propipeta
• vasos precipitados
• algodón

reactivos

• hexano
• acetato de etilo
• pasta de gel de sílice con hexano y acetato de etilo
• solución de Curcumina y Lawsona

procedimiento

1. Se procedió a poner una mota de algodón en una pipeta Pasteur y luego se rellenó con una pasta de gel de sílice (silicagel) en el eluyente que se usará para la separación (acetato de etilo / hexano 8:4).

1. Luego en la superficie se agregó 3 gotas de la solución que contiene la mezcla de ambos colorantes. Posteriormente se agregó eluyente con otra pipeta Pasteur hasta consiguió la separación de los componentes de la mezcla.

1. Antes de comenzar con la separación, se siembra la solución en una placa cromatográfica, luego de la separación siembre las fracciones puras al lado de la anterior, corra la placa y anote las observaciones. Observe la placa en ambas longitudes de onda ultravioleta de la lámpara.

Resultados

• Al realizar cromatografía en columna

Durante la separación de compuestos se observan dos colores amarillo y naranja  los cuales corresponden a la Curcumina y Lawsona respectivamente, el primer compuesto en salir (menos polar) es laCurcumina y el siguiente la Lawsona por sus estructuras moleculares y polaridad.  [pic 1]

• Al realizar cromatografìa en columna

Tabla nº1: Rf de diferentes compuestos en acetato de etilo con hexano.

Discusión

La Curcumina (color amarillo) bajo de manera más rápida que la Lawsona (color naranjo), así que primero se aisló la curcumina. Por otra parte la Lawsona fue más difícil de aislar, durante el práctico se intentó que la Lawsona bajará, por la columna de gel de silica, con más facilidad cambiando la proporción de de acetato de etilo/hexano, siendo la proporción final usada 4:2. Sin embargo, aunque aumentó la velocidad con la que bajaba por la columna la Lawsona, esta no salió lo suficientemente concentrada dando un liquido blanco, el cual se compone, en su mayoría, del solvente preparado y una cantidad despreciable de Lawsona. Por la poca cantidad de Lawsona que se logró conseguir el primer sembrado, en la fase estacionaria, no presentó ninguna coloración al estar expuesto a luz UV. En el segundo intento se obtuvo Lawsona más concentrada ejerciendo presión sobre la columna. La diferencia de difusión de estos dos compuestos reside en la afinidad de estos con el solvente que es poco polar, la Curcumina es poco polar por ello tiene gran afinidad por el solvente, lo que le permite bajar más rápido, por otra parte la Lawsona al ser más polar se moviliza de manera más lenta.( VOLVERÉ)

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