PRÁCTICO N°8: EXTRACCIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE PROTEÍNAS.

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PRÁCTICO  N°8:  EXTRACCIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE PROTEÍNAS.                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                              

OBJETIVO:

• Reconocer y diferenciar la presencia de un péptido o proteína en diferentes sustancias de uso común.
• Extraer proteínas de algunas sustancias y reconocer su naturaleza proteica.
• Investigar la presencia de glúcidos reductores en el suero obtenido al desnaturalizar la proteína de la leche de vaca.

MATERIALES:

• Vaso de Bohemia, varilla de vidrio, mechero, trípode, tela metálica, gradilla, tubos de ensayo, termómetro, papel de filtro, cuenta gotas, encendedor, centrifugadora manual.

SUSTANCIAS:

• Leche en polvo, gelatina sin sabor, clara de huevo, edulcorante “Aspartamo”.
• Ácido Etanoico 2,0M, NaOH al 10%, NaOH (ac) 20%, CuSO4 al 1%, HNO3 conc., Reactivo de Millón,

Pb (CH3COO)2 (ac) al 5%, Fehling A, Fehling B, Etanol.

PROCEDIMIENTO:

1. A- EXTRACCIÓN DE LA CASEÍNA DE LA LECHE

• Preparar aproximadamente 25 mL de leche en un vaso de Bohemia, disolviendo dos cucharadas de leche en polvo en cantidad de agua suficiente.
• Calentar hasta 40ºC, agitando con varilla de vidrio para homogeneizar.
• Adicionar por goteo 3mL (60 gotas) de ácido etanoico 2M, agitando en forma continua con varilla de vidrio.
• Centrifugar lo preparado, separar el coágulo formado y reservar el líquido para verificar presencia de glúcidos reductores.
• Al coágulo obtenido agregarle etanol y volver a centrifugar.
• Secar en papel de filtro el coágulo y fraccionarlo en cuatro tubos de ensayo para proceder a realizar reacciones de reconocimiento.

B- CARACTERIZACIÓN

• REACCIÓN de BIURET

• Agregar sobre la caseína del primer tubo, 20 gotas de NaOH al 10%, agitar bien y adicionar 2 gotas de CuSO4 (ac) al 1%. Coloración violeta amatista, indica presencia de enlace peptídico.

• REACCIÓN de  HELLER o XANTOPROTEICA

• Agregar sobre la caseína del segundo tubo de ensayo, 10 gotas de HNO3 (conc). Agitar.

              Coloración amarilla, indica presencia de proteínas con anillos bencénicos.

• REACCIÓN de MILLÓN

• Adicionar sobre la caseína del tercer tubo de ensayo 5 gotas de Reactivo de Millón. Calentar suavemente cuidando no carbonizar la proteína. Una coloración parecida a la de la carne hervida, indica presencia de  proteínas con grupos fenólicos.

• REACCIÓN DE AMINOÁCIDOS AZUFRADOS

• Agregar al cuarto tubo de ensayo con caseína, 1mL (20 gotas) de solución de hidróxido de sodio al 20%. Añadir 5 gotas de solución de acetato de plomo al 5%. Calentar hasta ebullición.

               La formación de un precipitado de color oscuro, indica presencia de proteínas que tienen en su composición    

               aminoácidos con azufre.

1. RECONOCIMIENTO DE PRESENCIA DE GLÚCIDOS REDUCTORES

• Investigar en el líquido reservadode al desnaturalizar a la proteína de la leche, la presencia de glúcidos reductores, de acuerdo a los ensayos realizados en el práctico “Propiedades de Glúcidos”.
• Determine qué glúcido/s , contiene la leche de vaca utilizada.

• REPETIR LOS ENSAYOS de CARACTERIZACIÓN ANTERIORES, PARA: GELATINA, ASPARTAMO Y OVOALBÚMINA (CLARA DE HUEVO).

 3- GELATINA

       - Disolver una cucharada de gelatina en agua suficiente y obtener una solución.

       - Separar en cuatro tubos de ensayo, aproximadamente 1mL en cada uno y proceder a realizar los ensayos de caracterización hechos para la caseína.

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