Taller Teórico Práctico N° 8: Tinción Hematológica

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Taller Teórico Práctico N° 8: Tinción Hematológica

Nombre Alumno        : Karina Pamela Rojas Espinoza

Docentes                : TM Benjamín Riveros C.        -       TNS Juan Antonio Galindo P.  

INTRODUCCIÓN:

Para poder observar los elementos figurados de la sangre y otros elementos de diagnóstico presentes en un extendido de sangre, se utiliza la tinción de eosina y azul de metileno, considerada como una tinción policromática.

El metanol presente en el May Grunwald, permite fijar las células al portaobjetos, por medio de un proceso fisicoquímico, durante el cual altera las propiedades químicas de las proteínas que forman las células para que posteriormente resistan el proceso de teñido preservando su estructura original, de manera de evitar su deformación celular

La tinción actúa una vez que se agrega el buffer (fosfato de sodio 0.05M –pH 6.4) o agua destilada envejecida (pH 6.4 – 6.8) permitiendo de esta manera que los colorantes Azul de Metileno como la Eosina ingresen a los compartimentos celulares, uniéndose a sus estructuras de destino hasta que la solución se convierta en polar, lo que se consigue al agregar agua a la preparación con colorante.

La solución Giemsa es mucho más polar que la solución May Grunwald, por lo que se debe rehidratar la solución antes de su aplicación

Las reacciones de tinción van a depender fundamentalmente del pH.

El Azul de Metileno libre es básico y tiñe los componentes celulares ácidos (o basófilos), como el RNA.

La Eosina libre es ácida y tiñe los componentes básicos (o eosinófilos), como la hemoglobina o los gránulos eosinófilos.

Los Neutrófilos se denominan así porque tienen gránulos citoplasmáticos con pH neutro y toman algunas características de tinción de ambos colorantes.

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Muestra: Sangre venosa con EDTA o capilar.

Reactivo:    

1. Colorante May Grunwald
2. Colorante Giemsa Solución Madre
3. Colorante Giemsa Solución de Trabajo diario (1 gota de colorante por ml. De agua neutra o buffer)
4. Agua destilada o buffer

Procedimiento:

1. Disponer el frotis con la extensión de la gota de sangre seca e identificada y enumerada en una cubeta de tinción
2. Cubrir íntegramente la preparación con solución May Grunwald por 1 - 3 minutos
3. Agregar una cantidad semejante de agua neutra o buffer a la preparación. La tensión superficial permite que muy poca cantidad de buffer se derrame
4. Mezclar la solución acuosa alcohólica soplando suavemente sobre la preparación
5. Dejar actuar por 3 minutos
6. Lavar el frotis por escurrimiento con agua de la llave bajo chorro suave, para evitar desprendimiento de la película de sangre teñida
7. Agregar 4 ml. De solución Giemsa diluida por cada frotis y dejar actuar por 15 – 20 minutos
8. Lavar suavemente el frotis con agua por escurrimiento
9. Secar por la parte posterior del portaobjetos con algodón o papel absorbente, retirando el excedente de colorante
10. Dejar secar a temperatura ambiente en posición vertical

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DESARROLLO TEMÁTICO:

I ITEM: Definición de Conceptos

Tinción Hematológica: es un conjunto de procesos que conducen a la coloración de las estructuras que componen las células sanguíneas. Esto tiene por objeto el aumentar el contraste entre esas estructuras y el medio que las rodea, y permite por tanto que las células sean visualizadas microscópicamente con mayor facilidad.

Mieloblasto: son células inmaduras y precursoras de los granulocitos, los cuales son un tipo de leucocitos. Se encuentran en la médula ósea.

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