ADN De La Cebolla

COMPARACION DE DOS METODOS DE EXTRACCIÓN DE ADN DE UNA CEBOLLA

RESUMEN

La extracción de ADN vegetal debe hacerse en una serie de etapas: se debe romper la membrana plasmática de la célula, en el caso de los vegetales también se debe romper la pared celular, se debe romper la membrana nuclear para dejar libre el ADN y este se debe proteger de enzimas que pueden degradarlo y se aísla precipitándolo en etanol. Se realizó la práctica llevando a cabo dos protocolos, en el protocolo uno se utilizaron los buffer uno y dos, para el protocolo dos se utilizó el buffer tres. Después de aisladas las muestras se midió espectrofotométricamente a 260 nm y 280 nm, además se realizo la electroforesis en gel de agarosa 1 %.

PALABRAS CLAVES: buffer, electroforesis, membrana nuclear DEISY BIBIANA CALLE

Estudiante

Universidad Tecnológica de Pereira

deisybcallep@hotmail.com

CARLOS ANDRÉS TORO

Estudiante de Química industrial.

Universidad Tecnológica de Pereira

condorblokeo@hotmail.com

1. INTRODUCCIÓN

El ADN constituye el material hereditario de un individuo. En él están escritas las instrucciones que deben seguir las células para construir un organismo y mantenerlo vivo. Todas las células que forman un individuo contienen una copia idéntica de ADN. Las células eucariotas como las nuestras o las de las cebollas, contienen ADN en el interior de un compartimiento llamado núcleo celular. Por ello, para extraer el ADN, deberemos romper la membrana celular y la membrana nuclear. Las células vegetales además cuentan con una pared rígida de celulosa que también tendremos que romper para liberar el ADN. En todo momento es muy importante proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y por ultimo debe aislarse utilizando etanol.

Una buena extracción de ADN es muy importante en estudios del genoma, mutaciones, secuenciación y procesos de ingeniería genética por lo que es preciso analizar cuál es el mejor procedimiento.

2. MATERIALES Y METODOS

2.1 MUESTRA VEGETAL se empleo aproximadamente 70 mg de tejido de cebolla de huevo empleada para la extracción de ADN.

2.2 PROCEDIMIENTO # 1:

Se tomó la muestra de cebolla, se maceró y se realizo el procedimiento tal y como la guía lo indicaba. En este procedimiento se empleo el buffer 1 y 2 de la siguiente manera:

• Se agrego 1 mL de Buffer 1, el cual tiene varias funciones. El EDTA se encarga de quelar iones presentes en la muestra como el Ca y Mg los cuales son cofactores para enzimas degradadoras como las endonucleasas, el mercaptoetanol ayuda en la desnaturalización de la doble cadena de ADN mediante la lisis de ciertos enlaces GC (Guanina-Citosina), el tris-HCl estabiliza el pH de la solución que es importante en la extracción de ADN para que no haya una lisis total de las hebras de ADN. Todos estos componentes ayudan a evitar una degradación del ADN y para aumentar la cantidad de ADN.

En este momento debe haber una solución con proteínas, ADN, enzimas y otros compuestos y moléculas, además de organelos celulares.

• Esta solución se centrifugo, en esta etapa precipitan los componentes de la mezcla más pesados como organelos (mitocondrias, fragmentos de pared y membrana celular, proteínas grandes y las hebras de ADN). El sobrenadante se desecho, este es rico en sustancias de peso molecular bajo.

• El pellet o precipitado se re suspendió con el buffer 2. En esta etapa pasan casi los mismos acontecimientos que cuando se agrego el buffer 1, pero además acá se adiciona NaCl que ayuda a la neutralización de las cargas presentes en las hebras de ADN y ayuda a aumentar la solubilidad de esta en gua.

• Luego se incubo la muestra a 60ºC por 15 minutos, acá se le da tiempo para que las reacciones aumenten la velocidad por el aumento de temperatura, y además a esta temperatura se desnaturaliza

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