ANALISIS DE LAS CONDICIONES OPTIMAS EN LA QUE LA AMILASA SALIVAL REACCIONA CON VELOCIDAD MAXIMA Y AFINIDAD HACIA EL ALMIDON

ANALISIS DE LAS CONDICIONES OPTIMAS EN LA QUE LA AMILASA SALIVAL REACCIONA CON VELOCIDAD MAXIMA Y AFINIDAD HACIA EL ALMIDON[pic 1]

RESUMEN:

En la presente práctica se analizó la actividad enzimática de la amilasa salival en diferentes condiciones y de ésta manera determinar en cual de ellas cumple su función  de  catalizar la reacción de hidrólisis de los enlaces 1-4 del componente α-amilasa al digerir el glucógeno y el almidón, de manera eficiente.

Para empezar se extrajo saliva, se filtró y se obtuvo la amilasa salival. En el proceso de determinar su temperatura óptima, se colocó la sustancia en diferentes temperaturas determinado que a temperatura de 40°C, la amilasa reacciona correctamente. Posteriormente se varió el pH de la amilasa a 3, 5,7 y 9, donde se evidencio que esta enzima actuó más eficazmente a pH 7, ya que en general las enzimas trabajan en medio neutro. Seguidamente se rotularon 4 tubos de ensayo que constaban de almidón, amilasa salival y amortiguador de pH optimo en diferentes concentraciones, para este procedimiento se determinó que la concentración optima de amilasa es de 1.8ml, debido a que a mayor concentración de la enzima catalizadora; habrá mayor velocidad enzimática. Para las concentraciones de sustrato se mezcló amilasa salival con la misma amilasa, con mercurio y plomo, donde solo hubo reacción con la primera, ya que los otros son inhibidores irreversibles. Finalmente se hizo una variación de concentración de sustrato que en este caso es el almidón, y se obtuvo que la enzima amilasa reacciona mejor con sustrato a concentración de 1ml.

Estas reacciones se determinaron con lugol, pues la enzima reaccionaba rápido y  se tornaba amarillo ocre.

PALABRAS CLAVES:

Amilasa salival, catalizar, hidrólisis, sustrato, enzima, inhibidores irreversibles.

INTRODUCCIÓN:

Las enzimas son moléculas de naturaleza proteica que actúan como catalizadores en todas las reacciones del metabolismo. En algunos de estos entrantes (centro activo) solo encaja una molécula: el sustrato,  y es ahí donde se transforma a productos de reacción. Estos se separan de la enzima lista para volverse a unir a otra molécula de sustrato, es decir, lista para volver a  actuar.

Al tratarse de proteínas con estructura terciaria globular están muy influidos por las condiciones del medio en el que tiene lugar la reacción.

Así el pH, por ejemplo, puede alterar la forma de la molécula de enzima, dificultando, o incluso impidiendo, su unión con el sustrato sobre el que actúa. En general, hay un pH en el cual la actividad es máxima (pH óptimo). Para valores muy alejados de este óptimo la enzima no funciona o se desnaturalice.

En el caso de la temperatura, al aumentarla  o cuando es muy baja, no hay reacción apreciable. Por ello, en las reacciones catalizadas por enzimas un aumento de temperatura también supondrá un aumento de velocidad. Pero un aumento de temperatura provoca una alteración de la estructura de la enzima y cuando se alcanza un cierto valor la enzima empieza a dejar de funcionar; incluso puede alterarse de modo irreversible (1).

Las enzimas  pueden afectarse negativamente por inhibidores que impidan la actividad enzimática, estos inhibidores pueden afectar el sitio activo de dos maneras: competitivamente, al bloquear el sitio activo, o no competitivamente, al pegarse en otro lugar de la enzima y alterar indirectamente la forma del sitio activo. (2).

De igual manera siempre y cuando haya sustrato disponible, un aumento en la concentración de la enzima aumenta la velocidad enzimática hacia cierto límite, por otro lado está el aumento del sustrato, es decir, a mayor concentración del sustrato, a una concentración fija de la enzima se obtiene la velocidad máxima. Después de que se alcanza esta velocidad, un aumento en la concentración del sustrato no tiene efecto en la velocidad de la reacción.

En esta práctica de laboratorio se analiza la actividad enzimática y los factores que la enzima α-amilasa salival, enzima de tipo hidrolasa que tiene la función de catalizar reacciones de hidrólisis de enlaces en presencia de agua, la cual  inicia la degradación del almidón actuando sobre los enlaces α 1-4 que unen residuos de glucosa en el almidón (4).

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METODOLOGÍA:

Para llevar a cabo el reconocimiento de los factores que afectan las enzimas se desarrolló una serie de procesos.

Preparación de la amilasa salival:

Se enjuago la boca tres veces con agua eliminando así  restos de alimentos.  Se midió en una probeta 60 ml de agua destilada y con ellos se enjuago la boca, en varios buches, por espacio de 3 minutos. La solución recogida se filtró a través de un algodón, se denominó amilasa salival, y se utilizó para realizar distintas procesos dentro de la práctica.

Influencia de la temperatura sobre la actividad de la amilasa salival:

Se rotulo cuatro tubos de ensayo 0, 20, 40, 90.  En cada uno se agregó 1 ml de suspensión de almidón al 0.5%.  El tubo 0 se colocó, durante 10 minutos, en un baño de hielo; el tubo 20 se dejó a temperatura ambiente; el tubo 40 se colocó en un baño de agua a 40 °C y el tubo 90 se colocó en un baño de agua hirviente, durante 10 minutos, para que el contenido de los tubos adquiera la temperatura correspondiente. Mientras se colocó 2 gotas de lugol en varias concavidades de la placa de porcelana. Al cabo de los 10 minutos se agregó a cada tubo sin retirarlo del baño, 0.5 ml de amilasa salival.  Se agito bien los tubos y se dejó durante 30 segundos a las condiciones de temperatura anteriormente señaladas. Al cabo de este tiempo se colocó cinco gotas del contenido cada tubo en una concavidad de una placa de porcelana a la que previamente se le adicionó dos gotas del reactivo de Lugol, y se observó el color producido La temperatura optima será aquella en la cual se observó más rápidamente el color amarillo ocre. Al permanecer el color  azul, se esperó 2 minutos y luego se repitió el procedimiento en la placa de porcelana.

Influencia del pH en la actividad enzimática

Se rotuló cinco tubos de ensayo 3, 5, 7 y 9; se los depositó en un baño de agua a la temperatura óptima y se agregó, en su orden sin retirarlos del baño las sustancias que se indican a continuación:

Tabla N°1. Indicador de sustancias que se agregó en el proceso de la Influencia del pH en la actividad enzimática

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