ANÁLISIS DE UN POLIMORFISMO DE ADN SILENCIOSO TIPO VNTR
Enviado por biofungitek2019 • 27 de Mayo de 2019 • Informes • 1.159 Palabras (5 Páginas) • 68 Visitas
ANÁLISIS DE UN POLIMORFISMO DE ADN SILENCIOSO TIPO VNTR
Las secuencias de nuestros ADN tienen una ¨huella dactilar¨.
Palabras claves: Polimorfismo, ADN, VNTR.
INTRODUCCIÓN
El análisis de un polimorfismo de ADN silencioso tipo VNTR; se ha convertido en una herramienta imprescindible en el análisis genético de interés forense, tales como la investigación de indicios en criminalística así como en la investigación biológica de la paternidad. Para llevar a cabo dichos análisis, se requieren de técnicas especializados como son la PCR y la electroforesis pero… ¿Qué es un polimorfismo de ADN? ¿Qué son las VNTR? ¿Qué son y con qué finalidad se usan las técnicas mencionados anteriormente?
¿Qué es un polimorfismo de ADN?
Un polimorfismo consiste en la variación en la secuencia
de ADN que afecta a una sola base (adenina, timina, guanina, citosina) de una secuencia del genoma de una región no codificante, es decir, de una región que no sea un exón. Para poder visualizar la variación donde se localiza una o más secuencias de ADN, se utilizarán las VNTR (Variable Number of Tandem Repeats) como marcadores.
[pic 1]Figura 1.
¿Qué son las VNTR?
Lugares o locus cuyos alelos difieren por tener un número variable de repeticiones en tándem (los pares de bases de ADN que se repiten, lo hacen de tal manera que uno se encuentra al lado del otro y éstas repeticiones se pueden usar como una huella genética).
Las VNTR se pueden obtener mediante la PCR de manera automática en un aparato denominado ¨termociclador¨.
Mediante esta técnica se amplifican los segmentos del genoma que contienen variaciones en el número de repeticiones utilizando primers o cebadores que rodean las secuencias de las VNTR. Una vez amplificado el ADN, se separan y se visualizan los fragmentos mediante la electroforesis en gel.
PCR- Reacción en cadena de la polimerasa.
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una técnica de laboratorio común utilizada para hacer muchas copias de una región particular de ADN a partir de una pequeña muestra de ADN.
La PCR requiere de una enzima ADN polimerasa que produzca nuevas cadenas de ADN mediante el uso de las cadenas existentes como molde, a su vez, ésta enzima también necesita de unos cebadores (secuencias de nucleótidos que proporciona un punto de partida para la síntesis de ADN).
Los cebadores se unen a una cadena molde de ADN por complementariedad de bases.
El ADN polimerasa extiende a los cebadores y añade nucleótidos en dirección 5’ a 3’.
[pic 2]Figura 2.
Para llevar a cabo una PCR, se sigue un protocolo que se basa en la repetición secuencial de ciclos de repetición. Cada ciclo consta de tres fases:
- Desnaturalización de la cadena molde de ADN, elevando la Tª a 95ºC durante 15-30 segundos.
- Renaturalización , para que los cebadores se unan con el ADN molde, se realiza a una Tª de 50-65ºC durante 30-60 segundos.
- Polimerización del nuevo ADN, se realiza a una Tª de 72ºC, su tiempo está condicionado por la velocidad de polimerización de la enzima y de la longitud del fragmento se va a amplificar.
[pic 3]Figura 3. Figura 4.
Electroforesis en gel de agarosa
La electroforesis consiste en aplicar una corriente a través de un gel (similar a la gelatina; suelen estar hechos de polisacáridos) que contiene las moléculas de interés. El gel tendrá pocillos a través de los cuales se introducirán las muestras de ADN.
Con base en su tamaño y carga, las moléculas se desplazarán por el gel en diferentes direcciones o a distintas velocidades, con lo que se separan unas de otras.
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