Analisis De Restriccion De Adn

BIOLOGÍA MOLECULAR Y GENÉTICA

EQUIPO No. 5

MEDICINA GRUPO 3

PROFESORA MÓNICA RODRÍGUEZ RAMÍREZ

Análisis de restricción de DNA plasmídico

11 DE MARZO DE 2015

STEFANNY LIZBETH CABRERA ORTEGA

JORGE SOLIS MERA

JOSÉ DAVID LINARES PÉREZ

MARCO TEORICO

El DNA plasmídico es más pequeño que el DNA genómico y se encuentra súper enrollado. Los plásmidos son vectores que permiten clonar ciertainformación genética de interés, para que se pueda expresar, combinándose con el DNA genómico (DNA recombinante).

Los plásmidos son moléculas pequeñas de DNA circular (entre dos y varios cientos de kilobases) que se replican de forma autónoma e independiente del cromosoma de la célula. Son muy comunes en bacterias y algunos de ellos, los más pequeños, existen en las células bacterianas en un número elevado (hasta 100 copias por células). Los plásmidos son una herramienta fundamental en Biología Molecular e Ingeniería Genética ya que se pueden usar como "vectores" para introducir en ellos cualquier fragmento de DNA de interés y, de esta forma, amplificarlo de forma natural dentro de la bacteria en la que el plásmido se replica. Existen muchos plásmidos disponibles para usar con este fin y la mayoría contienen al menos los siguientes elementos:

- Un origen de replicación autónomo para E.coli (ej. ColE1) que permite la replicación autónoma en esta bacteria.

- Un gen que confiere a la bacteria portadora del plásmido resistencia a algún antibiótico, generalmente ampicilina.

- Un sitio de clonación múltiple en el que se encuentra dianas únicas para varias enzimas de restricción y que permite la introducción del DNA a clonar.1

Referencia conceptual.

Los plásmidos son moléculas de ADN extracomosomico, circular y de pequeño tamaño que se encuentran en muchas especies de bacterias y que se caracterizan por que se pueden replicar de manera independiente del DNA cromosómico. A diferencia de este, los plásmidos no son necesarios para la viabilidad general de la célula. Pero pueden contener genes que contribuyen a la supervivencia en condiciones especiales como los que confieren resistencia a los antibióticos algunas clases de plásmidos poseen además la propiedad conocida como “replicación relajada” esto es, están presentes en forma de muchas copias por célula lo que facilita enormemente su aislamiento y purificación.

Los plásmidos poseen un interés singular en ingeniería genética por se uno de los sistemas vectores mas sencillos de usar ( un vector es el sistema que permite introducir en una célula un fragmento de DNA que se pretende clonar en esta célula anfitriona el vector se replica y se expresa en su caso. La molécula resultante de la unión de un vector con el ADN de interés (se denomina “inserto”) se denomina ADN recombinado.

Para se utilizado como vector de clonación un plásmido ideal debe poseer la capacidad de replicación autónoma, ser los más pequeño posible para permitir un fácil aislamiento y manejo, y contener sitios únicos de restricción y marcadores genéticos selectivos. la mayoría de los plásmidos naturales no cumplen todas estas condiciones por lo que una primera tareas de la ingeniería genética ha consistido en la construcción de plásmidos artificiales o recombinados, combinando en una misma molécula diversos rasgos útiles procedentes de los plásmidos naturales.

Hipótesis

Se digerirá el plásmido purificado con la endonucleasa de restricción

Eco RI, según el Protocolo 4. Los fr

agmentos obtenidos se separarán por

electroforesis en gel de agarosa (Proto

colo 5). Se discutirán los resultados

obtenidos por cada grupo y se identifi

carán las diferentes movilidades que

muestran los plásmidos intactos, o los

que han sido cortados por el enzima

de restricción.

Objetivos

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