Método extracción de antiocianinas en plata de higo

MÉTODO EXTRACCIÓN DE ANTIOCIANINAS EN PLATA DE HIGO (FICUS CARICA

Todos los higos serán embalados en bolsas de polietileno y almacenados a -25 °C hasta su análisis. Se seleccionan los higos libres de daños físicos y lesiones, para tener una muestra uniforme en buen estado.

El secado: Se deja el higo abierto por la mitad en bandejas perforadas a la luz del sol durante 7 días y girándolos cada 2 horas.

1. Aproximadamente 1 kg de muestras de higo se homogenizan con una licuadora durante 2 min.

2. Cien gramos (100 g) de muestra homogeneizada se extrae con 200 ml de acetona (100 %) durante 2 min.

3. La suspensión se filtra al vacío en un embudo Buchner con Papel de filtro Whatman #1.

4. La mezcla se vuelve a extraer con 200 ml de acetona al 70% durante 2 min, y se lleva a cabo la filtración

5. La mezcla se lava con 100 ml de acetona al 70% para obtener residuos incoloros.

6. Los filtrados (500 ml) se transfirieren a un embudo de separación y se añade 100 ml de cloroformo, se mezclan suavemente durante 1 minuto

7. Durante la noche la mezcla se colocó a 4 º C, esta se separa en dos fases, la fase acuosa de color rojo se coloca en un matraz rotatorio y la acetona residual se elimina mediante destilación en rota vapor a 40 º C bajo vacío

8. El extracto acuoso se llevó hasta 10 ml con agua ácida ( HCl al 0,01% )

IDENTIFICACION POR METODOS DE COLORACION

• Ensayo de Shinoda

Los flavonoides con el núcleo benzopirona (p. ej. flavonas, flavonoles, flavanonas, etc.) producen coloraciones rojizas cuando a sus disoluciones acuosas o alcohólicas se les adiciona magnesio sólido seguido de HCl concentrado. Aunque no se conoce el mecanismo de esta prueba, es muy utilizada para reconocer esta clase de compuestos.

• Ensayo con Zn/HCl

Al remplazar el Mg sólido por el Zn sólido en el procedimiento del ensayo de Shinoda, solamente los dihidroflavonoles (o flavononoles) producen coloraciones rojo-violetas. Las flavanonas y flavanoles no producen color o producen coloraciones rosadas débiles.

• Ensayo de Pacheco

El sólido flavonoide se calienta sobre una llama con unos pocos cristales de AcONa y 0.1 ml de anhídrido acético, luego con 0.1 ml de HCl conc.

Los dihidroflavonoles producen un color rojo característico. Las flavonas, chalconas, auronas, flavonoles y flavanonas dan una respuesta negativa.

• Cromatografía en papel

Para las antocianinas o sus agliconas se emplea, con buen resultado, el llamado Forestal (agua-ácido acético-ácido clorhídrico concentrada, 30:10:3, v/v). Aunque la mayoría de los flavonoides poseen color, cuando están depositados sobre el papel o capa delgada en cantidades de microgramos son casi incoloros, particularmente en disolventes ácidos (las chalconas, antocianinas y auronas muestran algo de color). La luz ultravioleta puede mostrar manchas amarillo-verdosas de flavonoles, cafés de flavonas, cafés o negros de antocianinas.

Los vapores de amoniaco al desaparecer permite efectuar otras pruebas, por lo que se recomienda el procedimiento siguiente:

1. Observar las manchas visibles (auronas, chalconas, antocianinas).

2. Examinar el papel con luz ultravioleta larga (300 nm) observando las manchas fluorescentes o manchas obscuras.

3. Observe de nuevo el papel a la luz ordinaria, las antocianinas se ven azul-grisáceo, las flavonas amarillas, las chalconas y auronas naranja-rojo.

PURIFICACION DE ANTIOCIANINAS

Se utilizó el extracto para la purificación. Y esta se llevó acabo utilizando cartuchos de C-18 que tiene 100 mg. Por 1 cc sorbente.

Los extractos obtenidos de las muestras liofilizadas, fueron pasados a través de un cartucho de 13 mm de longitud C–18 Sep–Pak® (Waters, división Millipore, MA), previamente activado con

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