Bioquimica

INTRODUCCIÓN

Las proteínas son compuestos químicos orgánicos formados por la unión de un gran número de ácidos aminados, los cuales se unen entre sí por medio de enlaces amídicos (que en este caso se denominan enlaces peptídicos).

Las proteínas desempeñan funciones muy importantes en el organismo, entre las cuales podemos mencionar:

a) Actividad enzimática.

b) Transporte de sustancias por los sistemas biológicos por ejemplo: lípidos y O2.

c) Ciertas hormonas son proteínas o derivados de aminoácidos.

d) Protección al organismo en el caso de los anticuerpos.

e) Movimiento en el caso de proteínas contráctiles.

f) Almacén de aminoácidos para la nutrición.

g) Actividades estructurales.

h) Generación y transmisión de impulsos nerviosos.

En ocasiones se hace necesario determinar la presencia de cantidad de proteína en diferentes clases de muestras, como sangre, leche, orina, etc. Para ello se cuenta con diferentes métodos, algunos de los cuales tienen como fundamento la capacidad de ciertos grupos funcionales para reaccionar con determinados compuestos, produciendo coloraciones específicas. Para los fines de esta práctica la aparición de dicha coloración se utilizará como prueba de la presencia de la proteína en la muestra problema.

Cuando es necesario hacer una determinación cuantitativa se utilizan métodos en los cuales la intensidad del color es medida y comparada con solución patrón, obteniendo con precisión la concentración de proteína en la solución problema.

Desde luego que existen otros métodos para hacer la determinación cuantitativa como son la ultra centrifugación y la electroforesis.

OBJETIVOS DE PRÁCTICA

Comprobar la presencia de proteína en la solución proporcionada por medio de reacciones de coloración específicas para ciertos aminoácidos o grupos funcionales en las proteínas.

MATERIALES, EQUIPO, INSTRUMENTOS, SUSTANCIAS

Solución de albúmina al 1%

NaOH al 10%

HNO3 concentrado

H2SO4 concentrado

CuSO4 la 5%

NaOH saturado

Reactivo de Millón

Reactivo de ninhidrina

Tubos de ensaye de 15x125

Pipetas de 10 ml

Gradilla para tubos

Mechero

Pinzas para tubo de ensaye.

PROCEDIMIENTO

1) Prueba de Biuret.

1- Tome un tubo limpio y agréguele 2 ml de solución de albúmina.

2- Agregue 2 ml de solución de NaOH al 10% y mezcle perfectamente (agite el tubo con cuidado).

3- Adicione solución de sulfato de cobre gota a gota hasta que aparezca una coloración azul violeta o púrpura.

2) Reacción Xantoprotéica:

1- En un tubo de ensaye coloque 2 ml de solución de albúmina.

2- Agregue 1 ml de HNO3 concentrado.

3- Caliente el tubo de ensaye con mucho cuidado sobre la llama directa (observe el cambio de color y lo que sucede al precipitado).

4- Enfríe el tubo bajo el chorro de agua y agregue lentamente y con mucho cuidado NaOH saturado, gota a gota hasta que la coloración se torne anaranjada.

3) Reacción de Millón:

1- En un tubo de ensaye coloque 2 ml de solución de albúmina.

2- Adicione 3 o 4 gotas de reactivo de Millón.

3- Mezcle perfectamente y caliente con cuidado sobre la llama pequeña del mechero (el calentamiento debe hacerse hasta ebullición).

4- Observar la formación de precipitado y como ésta va cambiando de coloración con el calentamiento.

4) Reacción de Ninhidrina.

1- Tome con una pipeta 2 ml de solución de albúmina colóquela en un tubo de ensaye.

2- Agregue 1 ml de solución de ninhidrina y mezcle bien.

3- Coloque

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