Bioquímica: Cálculo de los parámetros cinéticos de una enzima
Enviado por Bea Carbonero • 24 de Abril de 2018 • Informes • 1.099 Palabras (5 Páginas) • 242 Visitas
[pic 1]
Cálculo de los parámetros cinéticos de una enzima
practica 2
Beatriz Carbonero Acín | 1ºA Biotecnología
Fundamentos de Bioquímica | 16 de Abril de 2018
OBJETIVO
El objetivo global de esta práctica es determinar los parámetros cinéticos de velocidad máxima y constante de Michaelis-Mentenla de una enzima, haciendo uso de disoluciones de catecol a distinta concentración, la velocidad inicial y la absorbancia.
- Experimento 1:
Observar la variación de la velocidad y la concentración del producto respecto al tiempo.
La hipótesis de este experimento es “ La concentración del producto aumenta respecto al tiempo hasta un límite en el cual este se mantiene prácticamente constante, hasta que no hay más reactivo que hidrolizar”
- Experimento 2:
Observar cómo afecta la concentración de la enzima a la velocidad de la reacción y hallar la velocidad de la actividad enzimática.
La hipótesis de este experimento es “A mayor cantidad de enzima, habrá una mayor velocidad de reacción hasta que no haya más sustrato con el que reaccionar.”
- Experimento 3:
Comparar como afecta la concentración de sustrato a la velocidad de reacción.
La hipótesis de este experimento es : “A mayor concentración de sustrato, habrá una mayor velocidad de reacción, hasta que este se agote y velocidad permanezca constante.
RESULTADOS:
- Figura 1: Absorbancia en relación a la actividad enzimática
En estas figura 2, hemos relacionado la actividad de la enzima en soluciones de a distintas concentraciones a lo largo del tiempo
-Figura 1.1 : - Figura 1.2: [pic 2][pic 3]
-Figura 1.3 - Figura 1.4[pic 4][pic 5]
Basándonos en los resultados obtenidos podemos determinar que la concentración de sustrato disminuye a medida que avanza el tiempo de la reacción, al contrario que la concentración del producto que va aumentando. Todo esto ocurre en todas las reacciones, cuando solo tenemos un sustrato del que se comienza a formar producto.
- Figura 2: absorbancia en relación a la actividad enzimática. Calculo de velocidad inicial
Realizamos el cálculo de la velocidad inicial, esta se halla a partir de la velocidad media antes de que se consuma un 10% del sustrato y este se haya transformado en producto, es decir, en esta figura 2, hemos hallado la velocidad inicial, utilizando los 4 primeros valores de cada grafico de cada concentración de catecol, utilizando la ecuación de la grafico: y = mx ; siendo m la velocidad inicial
-Figura 2.1 -Figura2.2[pic 6][pic 7]
-Figura 2.3 -Figura 2.4[pic 8]
[pic 9]
[Catecol]mM | Recta de regresión ( 45 seg) | R2 | Vo (= m) |
1 | y= 0,0036 x | 0,9575 | 0,0036 |
4 | y= 0,0034 x | 0,9931 | 0,0034 |
8 | y= 0,0031 x | 0,997 | 0,0031 |
16 | y= 0,0032 x | 0,999 | 0,0032 |
- Figura 4: Michaelis Menten
[pic 10]
Ecuación de Michaelis-Menten: V = (Vmáx x [S]) / (Km + [S])
- Figura 5: Lineación de directos inversos: Linearizacion de Lineaweaver-Burk
Para realizar los cálculos de Km y Vmáx se puede hacer por dos maneras posibles: bien a través del diagrama de Lineweaver-Burk o también a través de Eadie-Hofstee. Nosotros utilizaremos el primer método. Aun así, también usaremos la ya mencionada ecuación de Michaelis-Menten
...