Laboratorio de bioquimica. Enzimas

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UNIVERSIDAD CATOLICA DEL MAULE

Facultad de Ciencias Agrarias y Forestales

Escuela de Agronomía

Enzimas

Antonela Andrea Baffíco Hernández-Emiliano René Campos Gonzales-Estefaní Alejandra Castro Lizana-Nicolás Antonio jara Ulloa-Catalina Andrea Serrano Rivero-Gabriel Segundo Trujillo Sánchez-Rodrigo Alejandro Urra Guerrero-Eloisa Baeza

Profesor guía: Rodrigo Bicharra

Carmen, Curicó

Mayo, 2016

Fecha de entrega:22/05/2016.

Fecha de recepción:

ÍNDICE

Resumen……………………………………………………………………………………………..3

Introducción………………………………………………………………………………………....4

Desarrollo……………………………………………………………………………………………5

        Experimento Nº1: Efecto de la temperatura……………………………………………………….5

                        Materiales y reactivos

                        Procedimientos y resultados

                        Tabla de resultados

        Experimento Nº2: Efecto del PH……………………………………………………………………8

Materiales y reactivos

                        Procedimientos y resultados

                        Tabla de resultados

        Experimento Nº3: Inhibición e inducción enzimática…………………………………………….9

Materiales y reactivos

                        Procedimientos y resultados

                        Tabla de resultados

Conclusión…………………………………………………………………………………………..11

Anexos………………………………………………………………………………………………12

Referenciasbibliográficas…………………………………………………………………………..13

RESUMEN

Las enzimas son catalizadores proteicos que aceleran la velocidad de las reacciones metabólicas, para el proceso de digestión; las biomoléculas deben ser degradadas a sus componentes más sencillos. Entre las principales enzimas que participan en la digestión se encuentra: la amilasa salival y pancreática para la digestión de los carbohidratos; la lipasa y Fosfolipasas para la digestión de lípidos; la pepsina y la Quimxiotripsina para la digestión de las proteínas.                                                                  

La digestión de los carbohidratos comienza en la boca, donde los alimentos son mezclados con la amilasa salival (ptialina) que degrada los enlaces alfa 1,4 del almidón liberándose maltosa, glucosa y dextrinas del almidón que posee todos los enlaces alfa 1,6 de la amilopectina.                                                   Algunos factores que afectan la acción enzimática son:   la temperatura; todas las enzimas tienen cierta termolabilidad, un aumento de temperatura acelera la velocidad de reacción. La temperatura a la cual se ve la máxima actividad enzimática se denomina temperatura optima.  El pH; donde se encuentran algunas enzimas puede ser ionizado (con carga) o no ionizado (sin carga). Los inductores o inhibidores pueden afectar la interacción del sustrato y la enzima; ya sea aumentando la actividad enzimática (inductores), o disminuyendo la actividad enzimática (inhibidores).

En los experimentos pudimos comprobar que cuando a la  saliva la incubamos a diferentes temperaturas y pH diferentes  las soluciones que están siempre en los extremos no tendrán variaciones, ya sea tanto en el color o cuando se inhiben (esto quiere decir que la solución vuelve a su estado original); por ejemplo cuando tenemos pH 2,5 que es acido la solución muestra que si hubieron cambios visibles; pero en el pH 10,0 básico la solución en los  primeros minutos mostro cambios visibles en el color pero luego la solución no presento más cambios. En los pH que son óptimos como el 5,4 y 6,0 y se tienen las temperaturas óptimas para que las enzimas realicen su función se ve que los cambios en la solución ocurren rápidamente  a diferencia de aquellos pH que se alejan de lo optimo.

INTRODUCCIÓN

        En el presente práctico pudimos observar y analizar las enzimas, específicamente la amilasa salival. Las enzimas son catalizadores proteicos estos, aceleran la velocidad de reacciones metabólicas. Las enzimas se ven afectadas por condiciones presentes en el lugar de acción donde se encuentran las enzimas, algunos de estos factores son: La temperatura, ya que, cuando colocamos una enzima a temperatura esta acelera la velocidad, pero si es una temperatura muy alta esta puede ser destruida. Otro factor es el pH, cada enzima tiene un pH característico y cualquier efecto contra este la enzima se verá afectada. Y el último factor es la inhibición e inducción.

        Dentro del practico podemos pudimos ver como reaccionaba la amilasa salival tras colocarla a calor, al alterarle el pH y por la inhibición e inducción, vimos como reaccionaba y sus principales cambios.

        El objetivo principal de este práctico es observar los cambios enzimáticos provocados por alteraciones de esta, como nombramos anteriormente, la temperatura, pH e inhibición e inducción.

DESARROLLO

Experimento Nº1: Efecto de la temperatura.

MATERIALES:

• 1 Gradilla
• 4 tubos de ensayo
• Pipetas (5 – 10 ml)
• 3 Vasos de precipitado (50 o 100ml)
• Varillas de agitación.
• Baño de agua
• Termómetro  

SOLUCIONES Y REACTIVOS:

• Solución de almidón al 1.
• Reactivo de Benedict.
• Yodo .
• Solución buffers.
• Agua destilada .
• Saliva Humana.

Método experimental y resultados

En un tubo de ensayo se junta 4 ml de amilasa salival, se experimentan en dos tubos enumerándolos del uno al dos para así poder distinguirlos. A ambos tubos se le agrega 1 ml de amilasa salival y 5 ml de almidón al 1%; luego se  agitan durante dos minutos para que quede una mescla homogénea. Luego de tener esta mezcla recurrimos a baño maría para así obtener las temperaturas requeridas que son 37° y 70°.

Al obtener la temperatura requerida, al tuvo de 37° se le agregan 3 gotas de yodo y observamos que tiene un cambio de color transparente a un color purpura oscuro y el tubo de 70° cambia de una color transparente a un color azul oscuro, luego de esto para ambos tubos repetimos el procedimiento de baño maría durante 3 minutos.

Transcurridos los 3 minutos de baño maría se vuelve a agregar 3 gotas de yodo y observamos el cambio se color. El tubo de 37° pasa de color púrpura oscuro a morado azulado oscuro mientras que al tuvo de 70° cambia de un  color azul oscuro a azul transparente y nuevamente repetimos el procedimiento de baño maría durante 3 minutos, después de esto agregamos 3 gotas de yodo y el cambio es el siguiente: tuvo de 37° no ocurre ningún cambio mientras que el tubo de 70° tiene un color azul negros. Repetimos el procedimiento de baño maría durante  3 minutos y finalmente el resultado obtenido es tuvo de 37° no ocurre ningún cambio y el tubo de 70° se obtiene un color celeste transparente.

Se toman dos tubos nuevamente son enumerados del 3 al 4, se agregan 1 ml de amilasa salival y 5 ml de almidón al 1 %, se mesclan hasta quedar una mezcla homogénea, se le agrega al tuvo N°3 y tuvo N°4   3 gotas de yodo, el tubo N°3 que estaba a temperatura de 0° tiene un cambio trasparente a un tono azul, al tubo N°4 el que estaba a temperatura  ambiente al agregarle 3 gotas de yodo tiene un cambio de color trasparente a un color azul y morado oscuro, al transcurso de 3 minutos se le vuelve agregar 3 gotas de yodo nuevamente, en el tubo N°3 no tiene cambio de ningún tipo de cambio, en el tubo N°4 al agregarle 3 gotas de yodo tiene nuevamente un cambio de color; a un color morado oscuro, en el Benedict en el tubo nº 3 tiene una reacción a trasparente la enzima catalizo la proteína, en cambio al  tubo nº 4 no produjo cambio en la mezcla quedando del mismo color.

TABLA DE RESULTADOS

Experimento N°2: Efecto del pH

1. Materiales

• Tubos de ensayos
• Solución saliva 1:9
• Solución buffer (pH 2.5, pH 5.4, Buffer pH 6.0, Buffer pH 6.8, Buffer pH 7.4, Buffer pH 8.0, Buffer pH 10.0.)
• Incubadora
• Almidón al 2%
• Solución de Benedict
• Cronometro
  

Procedimiento

Primero que todo agregamos 1.5 ml de solución salival 1:9 a cada tubo de ensayo, luego se añadió a cada tubo 3 ml de la solución buffer correspondiente

Tubo Nº 1: Sol. Buffer pH 2.5

Tubo Nº 2: Sol. Buffer pH 5.4.

Tubo Nº 3: Sol. Buffer pH 6.0

Tubo Nº 4: Sol. Buffer pH 6.8

Tubo Nº 5: Sol. Buffer pH 7.4

Tubo Nº 6: Sol. Buffer pH 8.0

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