Biotecnología Vegetal

Callo de tabaco___________________________________________

Objetivo

Obtención a partir de una sección (explanto) del tallo de una planta de tabaco (Nicotina tabacum L.), un callo.

Procedimiento

El tallo se ha de esterilizar con hipoclorito sódico en disolución acuosa y tres gotas de tween 20. Las hojas del tallo se retiran con cuidado ya que están imbricadas.

Posteriormente el explanto se coloca en un medio de cultivo sólido para que sus células comiencen a desdiferenciarse y se forme el callo. Se observa la evolución.

Se debe comentar que los callos pueden ser de dos tipos:

- Callo friable: Es de tipo translucido. Tiene grandes espacios intercelulares y aspecto de esponja. Es apto para iniciar suspensiones celulares. Son muy morfogenéticos.

- Callo compacto: De aspecto blanquecino.

Observaciones

Tras la recogida de datos se obtienen las siguientes observaciones:

1. Día 29/09/2011: Día en el que se coloca el explanto.

2. Día 20/10/2011: La gran mayoría de los explantos han formado callos friables (zonas gelatinosas). Son blancos.

3. Día 06/11/2011: Van apareciendo algunos callos oscuros que puede ser debido a contaminación o a que el tallo no se pelo del todo bien.

Ver resultados generales de crecimiento y contaminación:

DIA CONTAMINACIONES VIABLES

29/09/11 0 69

06/10/11 4 65

20/10/11 5 60

27/10/11 2 58

06/11/11 3 55

17/11/11 0 52

Ver resultados individuales:

DIA CONTAMINACIONES VIABLES

06/10/11 - 2

20/10/11 0 2

27/10/11 1 1

03/11/11 0 1

17/11/11 0 1

Una contaminación por mala manipulación.

Callo tabaco: organogénesis indirecta______________________

Objetivo

Observación de la organogénesis indirecta de un callo de tabaco.

Procedimiento

Se dice que es una organogénesis indirecta porque es vía callo. Primero se indiferencia el tejido, se forma callo y se transfiere a medio de cultivo distinto que induce rizogénesis o caulogénesis.

El callo utilizado es del día 31/08/2011, ya desdifrenciado. La mitad del callo se transfiere a un medio con acido indolacético (AIA), para la síntesis de raíces. Este medio de cultivo con el fragmento de callo desdiferenciado se coloca a oscuridad porque la rizogénesis se induce mejor en esta condición,

La otra mitad del callo se coloca en un medio rico en citoquininas (CK) que inducen la formación de tallo (con luz).

Observaciones

Día de la siembra de todos los cultivos fue el 6 de octubre.

Día 19 de octubre: 1º revisión:

• En los cultivos ricos en auxinas observamos que algunos de ellos tienen un cierto color marrón a causa de la síntesis de fenoles lo que refleja un envejecimiento natural o situación de estrés.

- También obtenemos 3 contaminados, los 3 por contaminación bacteriana.

- 10 son callos compactos y 16 son friables.

• En el cultivo rico en citoquininas se empieza a producir la fotosíntesis, los cultivos empiezan a tener color verde.

- 2 de los 25 sufren contaminación bacteriana.

27 de octubre: Los cultivos siguen evolucionando.

4 de noviembre:

• En los cultivos ricos en auxinas vemos que en algunos comienzan a salir espontáneamente raíces; son raíces con aspecto de pluma.

3 de los cultivos sufren contaminación bacteriana.

- En los cultivos ricos de citoquininas vemos que se empieza a dar en algún medio el fenómeno de la vitrificación. La vitrificación es un problema que se suele desarrollar en los cultivos “in vitro” y consiste en una variación de tipo epigenético, que es reversible y no genética.

1 de los 23 cultivos sufre contaminación bacteriana.

El último día:

- En los cultivos con auxinas vemos que 6 de ellos han desarrollado raíces de manera espontanea. Luego observamos otro tipo de raíces que tienen forma de pelillos, en concreto en 2 de los cultivos; eso es debido a que ha sido inducido por la concentración de hormonas que presenta el medio.

Uno de los cultivos se ha desarrollado tallo, fenómeno que no debería de darse en este medio.

- Por otro lado, en los cultivos con citoquininas 8 han desarrollado de manera muy clara parte aérea: hojas y tallo; presentan un color verde intenso, propio de la fotosíntesis.

Resultados generales de la recogida de datos referentes a callo con ↑AIA:

DIA CONTAMINACIONES VIABLES

06/10/11 - 26

20/10/11 3 23

27/10/11 0 23

03/11/11 3 20

17/11/11 2 18

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