MANUAL DE PRÁCTICAS DE LA MATERIA DE INTRODUCCIÓN A LA BIOTECNOLOGÍA VEGETAL
Enviado por Omar Ecobiologo • 28 de Junio de 2020 • Documentos de Investigación • 4.352 Palabras (18 Páginas) • 84 Visitas
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA CHAPINGO
PREPARATORIA AGRÍCOLA
AREA DE AGRONOMÍA
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“MANUAL DE PRÁCTICAS DE LA MATERIA DE INTRODUCCIÓN A LA BIOTECNOLOGÍA VEGETAL”
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ENRIQUE MIRILLO REYES
ISAÍAS GIL VÁZQUEZ
Chapingo, Méx.
1.- ESTRUCTURA Y COMPONENTES BÁSICOS DE UN LABORATORIO DE CULTIVOS DE TEJIDO
Un laboratorio de cultivo de tejidos se compone fundamentalmente de cuatro áreas básicas:
- Área de preparación de medio de cultivo.
- Área de esterilización y lavado.
- Área de siembra.
- Área de incubación.
A) Área de preparación de medio de cultivo.
En esta área se preparan los medios de cultivo y las soluciones madre a partir de las distintas sustancias químicas que lo componen, preferentemente de calidad analítica o a partir de mezclas preparadas comercialmente.
La zona de preparación de medios debe contar con espacio de almacenamiento para sustancias químicas (estantes o armarios abiertos y con alacenas para depositar material de cristaleria9.
Algunos de los equipos necesarios para esta área son:
- Refrigerador o congelador.
- Balanza analítica.
- Agitador magnético.
- Balanza granataria electrónica.
- Potenciómetro.
- Horno de microondas.
- Mechero bunsen
- Matraces Erlenmeyer.
- Probetas graduadas.
- Vasos de precipitado.
- Pipetas graduadas.
- Espátulas y micro espátulas.
- Frascos de color ámbar para soluciones madre.
- Frascos gerber
B) Área de esterilización y lavado
Esta área debe contar con alguno de estos equipos:
- Autoclave.
- Destilador.
- Desionizador.
- Estufa de secado.
C) Área de siembra
Requiere básicamente de:
- Campanas de flujo laminar.
- Gradillas o soporte para los instrumentos.
- Mechero bunsen o mechero para alcohol.
- Micro aspersores.
- Microscopios de disección.
D) Área de incubación
- Estantería con luz.
- Gradillas para tubos de ensaye.
- Termómetro de máximas y mínimas.
- Higrómetro.
2.- MEDIOS DE CULTIVO Y SUS COMPONENTES.
2.1.- Medio de Murashige y Skoog (1962)
Existen diferentes medios de cultivo para el desarrollo de células, tejidos y órganos al igual para las múltiples especies que se trabajan en cultivo de tejidos. A continuación mostramos las formas de preparar las soluciones stock con las sales minerales de Murashige and Skoog (1962).
Cuadro 2.- Datos para la preparación de soluciones Skoog o soluciones madre.
REACTIVOS | MS (mg/lt) | g/lt | Volumen a añadir (por litro) | g/100 ml |
Solución A | g/lt (50 veces/lt) | |||
[pic 4] | 1650 | 82.5 | 20 ml | 8.25 |
[pic 5] | 1900 | 95.0 | 20 ml | 9.5 |
Solución B | g/lt (200 veces/lt) | |||
[pic 6] | 6.2 | 1.2 | 5 ml | 0.12 |
[pic 7] | 170 | 34.0 | 5 ml | 3.4 |
Kl | 0.83 | 0.17 | 5 ml | 0.017 |
[pic 8] | 0.25 | 0.05 | 5 ml | 0.005 |
[pic 9] | 0.025 | 0.005 | 5 ml | 0.0005 |
Solución C | g/lt (200 veces/lt) | |||
O[pic 10] | 440 | 88.0 | 5 ml | 8.8 |
Solución D | g/lt (200 veces/lt) | |||
O[pic 11] | 370 | 74.0 | 5 ml | 7.4 |
O[pic 12] | 22.3 | 4.46 | 5 ml | 0.45 |
O[pic 13] | 8.6 | 1.72 | 5 ml | 0.17 |
O[pic 14] | 0.025 | 0.005 | 5 ml | 0.0005 |
Solución E | g/lt (200 veces/lt) | |||
EDTA[pic 15] | 37.3 | 7.46 | 5 ml | 0.746 |
O[pic 16] | 27.8 | 5.56 | 5 ml | 0.6 |
Solución F | g/lt (200 veces/lt) | |||
Thiamina HCl | 0.1 | 0.02 | 5 ml | 0.002 |
Ácido nicotínico | 0.5 | 0.10 | 5 ml | 0.01 |
Piridoxina (vit.B6) | 0.5 | 0.10 | 5 ml | 0.01 |
Glicina | 2.0 | 0.40 | 5 ml | 0.04 |
Solución G | g/lt (200 veces/lt) | |||
Myo- inositol | 100 | 20.0 | 5 ml | 2.0 |
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