CROMATOGRAFIA

INTRODUCCION

CROMATOGRAFIA

La cromatografía es una técnica analítica de separación en que la muestra compleja se desplaza de una fase móvil, que puede ser un gas, un líquido o un fluido, a través de una fase estacionaria fijada a una columna o una superficie solida. Las moléculas fuertemente retenidas por la fase estacionaria se moverán lentamente con el flujo de la fase móvil, mientas que las que se unen débilmente a la fase estacionaria serán arrastradas por la fase móvil. Debido a esta distintiva movilidad los componentes de una muestra se van a separar por bandas o zonas discretas que podrán ser analizadas cualitativamente o cuantitativamente.

HPLC

La cromatografía líquida de alta eficacia (HPLC) es la técnica analítica de separación más utilizada en la actualidad debido a su sensibilidad, a su adecuación para realizar determinaciones cuantitativas exactas y a su gran aplicabilidad a diferentes tipos de sustancias (aminoácidos, proteínas, ácidos nucleicos, hidrocarburos, carbohidratos, fármacos, plaguicidas, antibióticos, especies organometalicas y sustancias inorgánicas).

En un principio se utilizo alta presión para incremental la velocidad lineal y reducir la difusión de los compuestos en el interior de las columnas empaquetadas, mejorando así la resolución cromatográfica empleando bombas que generaban hasta 500 psi y recibió el nombre de high- pressure liquid chromatography (cromatografía liquida de alta presión). En los 70´s se utilizo bombas capaces de generar hasta 6000 psi, mejores inyectores y detectores y columnas con partículas más pequeñas en ese momento se nombro HPLC high- performance liquid chromatography (cromatografía liquida de alta eficacia). En la actualidad para incrementar la resolución, la velocidad y la sensibilidad en la cromatografía liquida se ha introducido columnas con partículas más pequeñas e instrumentos adecuados para bombear la fase móvil a presiones de 15000 psi o incluso 100 000 psi, recibiendo el nombre de UPLC ultra.performance liquid chromatography (cromatografía liquida de ultra eficacia).

COMPONENTES DE UN SISTEMA HPLC

• SISTEMAS DE BOMBEO

Un sistema de bombeo en HPLC debe ser capaz de generar elevadas presiones, producir un flujo libre de pulsaciones, conseguir un amplio intervalo de caudales con elevada reproducibilidad y estar dotado de componentes resistentes a la corrosión. Las bombas empleadas comúnmente son: las reciprocas, las de desplazamiento y las neumáticas.

• SISTEMA DE INYECCION DE LA MUESTRA

Los sistemas de inyección hacen posible la introducción de la muestra sin despresurizar el sistema y sin sobrecargar la columna. La mayor parte de los sistemas de HPLC utilizan inyectores automáticos.

• DETECTORES

Es un instrumento con la capacidad de percibir la presencia de un compuesto y enviar la señal eléctricamente correspondiente a un ordenador de registro. Entre sus características se pueden citar: alta sensibilidad, respuesta lineal para los diferentes analitos, la reproducibilidad y el tiempo de repuesta corto. De manera general se distinguen dos tipos de detectores. Los primeros son los que están basados en la medida de une propiedad de la disolución, destacando los detectores que miden el índice de refracción y la densidad. Los segundos están formados por aquellos que miden una propiedad de los compuestos que se desean separar, destacando los que mide absorbancia, fluorescencia y espectrometría de masas. En una práctica de HPLC se usan ambos detectores, colocados en serie o paralelo.

• COLUMNAS

La fase estacionaria está contenida en un tubo con terminaciones, aisladas por ambos lados que debe ser capaz de contener la presión generada en su interior tanto durante su fabricación como en su uso. Las columnas deben proporcionar un camino controlado y adecuado para la entrada y salida de la muestra, sin fuga, con el mínimo volumen posible y sin volúmenes muertos.

Además deben ser químicamente inertes respecto al sistema de separación (muestra, fase móvil, fase estacionaria).

La mayor parte de las columnas de separación están constituidas de acero inoxidable para conseguir mayor resistencia a la presión.

• MODOS DE SEPARACION EN HPLC

Hay tres características principales que se pueden usar para conseguir una separación en HPLC: polaridad, la carga y el tamaño molecular.

5-HT= serotonina

5-HIAA= Acido 5-hidroxi-indol-acetico

SCN= Núcleo supraquiasmático

DR= Núcleo dorsal de rafé

DISCUSION

En los resultados de grupo de control de privación del sueño y la desnutrición muestran que estos factores incrementa la concentración de 5-HT y 5- HIAA en el núcleo supraquiasmático y núcleo dorsal del rafé, como se indica en Chen et al. (1997) y Datta et al. (2000). Entonces entre los factores de aumento de serotonina en el modelo de desnutrición están la absorción

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