Cromatografia

Introducción.

Cromatografía

La cromatografía es un método físico de separación para la caracterización de mezclas complejas basada en el principio de retención selectiva, cuyo objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichos componentes.

Es la técnica que separa una mezcla de solutos basada en la velocidad de desplazamiento diferencial de los mismos que se establece al ser arrastrados por una fase móvil (liquida o gaseosa) a través de un lecho cromatográfico que contiene la fase estacionaria, la cual puede ser sólida o líquida.

Existen diferentes tipos de cromatografía pero en este caso solo nos interesan dos:

Cromatografía sólido-líquido: la fase estacionaria es un sólido y la móvil un líquido. (Capa fina, papel o columna)

Cromatografía líquido-líquido: ambas fases son líquidos y en la estacionaria el líquido se ancla a un soporte sólido.

Cromatografía en capa fina

Los métodos de cromatografía en plano, incluyen la cromatografía en capa fina, cromatografía en papel y electro cromatografía. En todos los casos se emplea una capa plana y relativamente delgada de una materia que a la vez es el soporte o bien que recubre una superficie de vidrio, plástico o metálica. La fase móvil se mueve a través de la fase estacionaria por capilaridad, a veces ayudada por gravedad o por aplicación de un potencial eléctrico. En la actualidad la cromatografía en plano se centra en la técnica de la capa fina, que es más rápida, tiene mejor resolución y es más sensible que su alternativa en papel.

Cromatografía en columna: Las separaciones en la cromatografía en columna pueden realizarse por reparto, adsorción o intercambio iónico. Puede usarse cualquier medio adsorbente siendo los más generales la celulosa, gel de sílice, alúmina oxido de magnesio, oxido de cálcico y carbón activo (para separaciones por adsorción y de intercambio iónico). En todos los casos solo pueden obtenerse óptimos resultados si se tiene cuidado en la selección del medio. El estado físico del adsorbente ha de ser de tal manera que permita el empaquetamiento uniforme de la columna y el flujo libre de disolvente a través de ella.

Objetivos

Conocer las diferentes polaridades y el poder eluyente de los disolventes a utilizar en el laboratorio por medio de la cromatografía en capa fina.

Separar correctamente los componentes del perejil por medio de la cromatografía en columna.

Hipótesis

Mediante el uso de la cromatografía en capa fina se podrán elegir los disolventes más adecuados en base a la diferencia de polaridades de los mismos, para poder aplicar la cromatografía en columna y separar todos los componentes del pigmento que se obtuvo del perejil.

 Variable independiente

• Polaridad

 Variable dependiente

Lista de materiales

Maceración y lavado

• Embudo e separación

• Matraz Erlenmeyer 500 ml

• Embudo tallo largo

• Pipeta

• Perilla de succión

• Soporte universal

• Aro metálico

• Motero con pistilo

Cromatografía en capa fina

• Cámara cromatográfica

• Papel filtro

• Porta objetos

• Tubos capilares

• Probeta graduada

• Pipeta graduada

Cromatografía en columna

• Soporte universal

• Bureta graduada de 25 ml

• Pinzas dobles de presión

• Tubos de ensaye

• Matraz Erlenmeyer

• Algodón

• Arena

• Gradilla

• Parilla de calentamiento

• Vaso de precipitado

Reactivos

• Disolventes orgánicos

• Perejil

• Sílice en gel

Procedimiento experimental

• Maceración y lavado del perejil

Sobre un mortero se cortó el perejil en trozos muy pequeños para posteriormente con el pistilo poderlo macerar hasta obtener una papilla y las primeras trazas del liquido del mismo, una vez obtenida esta masa se le agregó 10 ml de acetona para terminar de separar el componente liquido del solido se agitó durante 10 segundos de manera constante y se dejó reposar durante 5 minutos, una vez pasado este tiempo se le agrego 5 ml de agua y 10 de éter de petróleo se volvió a agitar hasta notar que las hojas del perejil perdieron su coloración, una vez que se termino este procedimiento se filtro en un embudo de separación para poder lavar el componente liquido con salmuera para la eliminación de posibles impurezas como se muestra en la figura 1, después del lavado se guardó el componente en un frasco limpio con sulfato de sodio como agente desecante.

• Pruebas de Polaridad y Cromatografía en capa fina

Lo primero que se preparó fue una mezcla de sílice con acetato de etilo para preparar las placas cromatográficas una vez preparadas se activaron en la mufla por 30 minutos, en lo que se activaban las placas

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