Colorimetría y curva de calibración
Enviado por laura_ly3 • 2 de Marzo de 2019 • Prácticas o problemas • 1.981 Palabras (8 Páginas) • 1.037 Visitas
Título de la Práctica: | Práctica No. | Equipo No. |
Introducción a la Colorimetría -Construcción de una Curva de Calibración | #1 | #1 |
Integrantes del Equipo: | Fecha de realización | Fecha de Entrega |
Laura López Yáñez. Ariadne Larrazabal Sierra Luis Enrique Castillo | 26/Febrero/2019 | 27/Febrero/2019 |
Horario de laboratorio | ||
Miércoles 14– 16 hr. |
Objetivo de la Práctica |
Determinar la concentración de fenolftaleína de una muestra problema mediante espectrofotometría |
Reactivos | Equipo y Materiales |
Para esta práctica los reactivos utilizados fueron:
| Para esta práctica los materiales fueron:
|
Fundamento Teórico del Método Utilizado |
La colorimetría es una de las técnicas empleadas con mayor asiduidad en los laboratorios de Bioquímica. Esta técnica suministra información cualitativa y cuantitativa sobre sustancias en disolución. El colorímetro es un instrumento diseñado para dirigir un haz de luz paralela monocromática a través de una muestra líquida y medir la intensidad del haz luminoso emergente. Estas técnicas se basan en la medida de la absorción de radiación de la zona visible por sustancias coloreadas. En algunas ocasiones la muestra que deseamos determinar no posee color por si misma; en tal caso, es preciso llevar a cabo un desarrollo de color empleado reactivos que den lugar a sustancias coloreadas con la muestra que interesa estudiar. La absorbancia de una solución es directamente proporcional a su concentración –a mayor número de moléculas mayor interacción de la luz con ellas- Si se hace pasar un haz de luz monocromática a través de la solución coloreada, la luz que salga de la solución se encontrara con una intensidad disminuida; Por medio de instrumentos (espectrofotómetros) capaces de generar este tipo de luz, así como de cuantificar esta variación de la luz transmitida nos permitimos realizar cuantificaciones más precisas y exactas. |
Resultado | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Para esta primer práctica calculamos valores a una absorbancia de 550 nm, primero[pic 4] que nada, para completar la tabla indicada en el reporte, calculamos la concentración de fenolftaleína en cada una de las muestras para su preparación. Para dichos cálcu- lo, primero se utilizó la fórmula de C1V1= C2V2. Con los valores obtenidos del volumen a colocar, calculamos cuantos mL de agua des- tilada requeriría la solución para llegar a un punto en común de 5 mL. Por último, despejando C2 de la formula completamos la tabla presentada a continuación Concentración “real” de los datos Absorbancia de 2.0436: ((2.0436-1.8671)/(2.0608-1.8671))(0.00066-0.000428)+(0.000428)=0.00063 Absorbancia de1.8796: ((1.8796-1.8671)/(2.0608-1.8671))(0.00066-0.000428)+(0.000428)=0.000449 Absorbancia de 1.9659 : ((1.9659-1.8671)/(2.0608-1.8671))(0.00066-0.000428)+(0.000428)=0.00054633
[pic 5] Tabla de resultados de la preparación y lectura de la curva de calibración
[pic 6] [pic 7] Colorimetría respecto a sus concentraciones reales. Datos de absorbancia obtenidos a través del espectrofotómetro.
|
Discusión de Resultados |
Una vez que se obtuvieron las absorbancias de la muestra en el cromatógrafo se observó en la tabla de resultados que los tres últimos resultados no coincidían con la secuencia de datos que se estaba obteniendo, a pesar de que las condiciones en las que se midieron eran iguales en todos, estos resultaron tener una menor concentración. Se considerando que fue debió a que hubo una mala medición de la sustancia al momento de agregar el soluto y el solvente o debido a que las celdas donde se colocaron las muestras no estaban debidamente limpias afectando así los resultados obtenidos. |
Respuestas a las Preguntas de la Práctica |
1.- Observaciones experimentales y gráficas de los resultados. [pic 8] [pic 9] Los datos obtenidos durante la experimentación no resultaron exactamente de la manera que deberían, los datos de absorbancia obtenidos en lugar de ir todos en forma ascendente, a partir del cuarto dato empezaron a variar por mucho, ya sean muy por arriba o por debajo del dato que se tenía, siendo incongruente, por lo que solo se graficaron los primeros 4 datos de absorbancia obtenidos respecto a su concentración, lo cual provoca que nuestra curva de calibración tenga una desviación importante representando una gráfica no del todo lineal, dando esto que nuestro resultado no sea lo más exacto posible. 2.- ¿En qué se diferencian la densidad óptica, absorbancia y transmitancia? La densidad óptica es la absorción de un elemento óptico por unidad de distancia, para una longitud de onda determinada. Mientras más alta es la densidad óptica, más corta es la transmitancia. La transmitancia (T) de una sustancia en solución es la relación entre la cantidad de luz transmitida que llega al detector una vez que ha atravesado la muestra, y la cantidad de luz que incidió sobre ella y se representa normalmente en tanto por ciento. La transmitancia nos da una medida física de la relación de intensidad incidente y transmitida al pasar por la muestra. La absorbancia (A) es un concepto más relacionado con la muestra puesto que nos indica la cantidad de luz absorbida por la misma, y se define como el logaritmo de 1/T, en consecuencia: A = log 1/T = -log T. Cuando la intensidad incidente y transmitida son iguales, la T es del 100% e indica que la muestra no absorbe a una determinada longitud de onda, y entonces A vale log 1 = 0. Tanto la Transmitancia y la Absorbancia se determinan por medio del espectrofotómetro que es el instrumento que permita la comparación de la radiación absorbida y transmitida por una solución en la cual el soluto no está determinado. 3.- ¿Qué tipo de espectrofotómetro se utilizó para esta práctica? Se utilizó un Beckman DU 7400 que tiene un rango de longitud de onda de 190nm a 800nm por lo que el tipo de espectrofotómetro usado fue un espectrofotómetro de UV-visible. 4.- ¿Qué otros equipos pueden emplearse para una determinación similar? Además del espectrofotómetro UV-vis, se puede utilizar un espectrofotómetro infrarrojo u otros equipos como lo son los colorímetros, los cuales como su nombre lo dice identifican un color y cuantifican su intensidad. 5.- ¿Cuál es la función de los filtros, prismas y las rejillas de difracción? Los filtros ópticos son un medio que solo permite el paso a través de la luz con ciertas propiedades, suprimiendo o atenuando la luz. Los filtros tienen propiedades que los caracterizan.
Los tipos de filtros ópticos más eficaces y más utilizados son los filtros de interferencias. En su forma más sencilla, constan básicamente de una capa de dieléctrico de espesor λ/2 entre dos láminas con superficies internas de tipo semi-espejo. Un prisma es un objeto capaz de, refractar, reflejar y descomponer la luz en los colores del arco iris. Generalmente, estos objetos tienen la forma de un prisma triangular, de ahí su nombre. El prisma funciona de acuerdo con la ley de Snell, cuando la luz pasa del aire al vidrio del prisma disminuye su velocidad, desviando su trayectoria y formando un ángulo con respecto a la interface. Como consecuencia, se refleja o se refracta la luz. El ángulo de incidencia del haz de luz y los índices de refracción del prisma y el aire determinan la cantidad de luz que será reflejada, la cantidad que será refractada o si sucederá exclusivamente alguna de las dos cosas.
Una red de difracción es un aparato óptico simple que opera principalmente en la interferencia constructiva. Consiste en un material óptico sobre el que se trazan una serie de surcos o rayas paralelas mediante puntas de diamante. Esas “rayas” tienen un espaciado controlado por ordenador y pueden ser “réplicas” de otras trazadas previamente sobre una red maestra de bondad comprobada. Finalmente, la superficie rayada se recubre con un material altamente reflectante a la radiación a dispersar. El rendimiento de una red es dado por la calidad del espacio de las rayas y la calidad de depósito del material reflectante. 6.- Indique y registre los errores determinados e indeterminados en la presente práctica. En este caso los errores indeterminados que podrían llegar a presentarse en la medición de mililitros utilizados por error de paralaje por lo que se agregó menos sustancia de la que se pedía y en el caso de los determinados podrían ser que los recipientes donde se colocó la muestra no estaban del todo limpio y no lo distinguimos. 7.- Indique qué tipo de error analítico se presentó en el ensayo y de qué forma se puede prevenir. Para no volver a cometer los mismos errores obtenidos en esta práctica, funcionaria el tener todos los tubos de ensaye del mismo estilo para poder comprobar a simple vista que la concentración va a ser distinta, que al momento de usar los recipientes, darles una segunda lavada cuando nos toque a nosotros para poder asegurar que estén completamente limpios y que se pueda medir de manera correcta la concentración de la solución. |
Conclusiones |
En esta práctica se tenía como objetivo determinar la concentración de fenolftaleína de una muestra problema mediante el uso del espectrómetro. Este objetivo se cumplió parcialmente, debido a que los datos obtenidos durante la experimentación no resultaron exactamente de la manera que deberían, los datos de absorbancia obtenidos en lugar de ir todos en forma ascendente, a partir del cuarto dato empezaron a variar por mucho, ya sean muy por arriba o por debajo del dato que se tenía, siendo incongruente, lo cual hace imprecisa la determinación de fenolftaleína en nuestra muestra problema ya que los datos no deberían de resultar de esta manera y provoca que nuestra curva de calibración tenga una desviación importante y nuestro resultado no sea lo más exacto posible, esto debido a errores humanos en la preparación de las soluciones, posiblemente una contaminación en las soluciones o bien, mala calibración de los equipos volumétricos utilizados para la preparación de las mismas. Para este caso en particular propondríamos la revisión de dichas variables que pudieran causar estos errores y mejorar en la observación y la técnica de preparación de soluciones. |
...