Concentración De Sustrato

Introducción:

En una cinética enzimática, al tomar todas las condiciones de reacción constantes; dejando como variable la concentración de sustrato, y aumentando dichas concentraciones, en una seria de determinaciones, influirá directamente en la velocidad de reacción.

Esto sucede ya que la enzima puede soportar en su estructura, cierto número de moléculas de sustrato, para así transformarlas en sus respectivos productos; y al aumentar la concentración, la reacción será más eficiente, ya que la enzima tiene más sustrato con el cual “trabajar”; sin embargo existe un punto en el cual los sitios activos de la enzima se saturan de sustrato, y la velocidad de reacción aumenta muy lentamente, a esto se le conoce como cinética de orden cero.

La concentración de sustrato para obtener la mitad de la velocidad maxima (1/2 VMAX) se le denomina KM (Constante de Michaelis) y se expresa en unidades de concentración de sustrato (moles por litro). KM es la medida aproximada de la afinidad de una enzima por su sustrato, cuanto menor sea el valor de KM mayor será la afinidad.

Objetivo:

Comprender el efecto que tiene la concentración de sustrato en la velocidad de reacción enzimática.

Resultados:

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Tubo 5 Tubo 6

Absorbencia 0.276 0.438 0.505 1.047 1.115 0.917

AR (μmoles)/2ml 2.4 3.8 4.5 9.2 10.3 8.3

Vo (U.I) 0.24 0.38 0.45 0.92 1.03 0.83

[S] (moles/L)=M 0.023 0.045 0.07 0.12 0.18 0.23

Cálculos de [AR] y Vo:

De acuerdo a la absorbencia obtenida en cada muestra de su respectivo tubo de ensaye, podemos interpolar en nuestra curva tipo de azucares reductores para la que cantidad de azucares reductores. Obteniendo con este valor la velocidad en unidades invertasa.

Vo=([AR])/(2(productos)x5(min⁡) )

Tubo 1: Tubo 2: Tubo 3:

Vo=2.4/10=0.24 Vo=3.8/10=0.38 Vo=4.5/10=0.45

Tubo 4: Tubo 5: Tubo 6:

Vo=9.2/10=0.92 Vo=10.3/10=1.03 Vo=8.3/10=0.83

Cálculos para la [S]:

Tubo 1:

0.45moles------1000ml

? ---------------0.1ml = 45x10-6moles

Ahora:

45 x10-6moles--------2ml

? --------------1000ml =0.023moles/1L =0.023M

Tubo 2:

0.45moles------1000ml

? ---------------0.2ml = 90x10-6moles

Ahora:

90x10-6moles--------2ml

? --------------1000ml = 0.045moles/1L =0.045M

Tubo 3:

0.45moles------1000ml

? ---------------0.3ml = 140x10-6moles

Ahora:

140x10-6moles--------2ml

? --------------1000ml = 0.07moles/1L = 0.07M

Tubo 4:

0.45moles------1000ml

? ---------------0.5ml = 230x10-6moles

Ahora:

230x10-6moles--------2ml

?

...