PRÁCTICA: EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO E INHIBIDORES SOBRE LA VELOCIDAD DE REACCIÓN

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA

PRÁCTICA: EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO E INHIBIDORES SOBRE LA VELOCIDAD DE REACCIÓN

GRUPO: 2OV1

BIBLIOGRAFÍA

Nelson D. 2004. Principles of Biochemistry. 2004, 4a edition Ed. Freeman and company, pp. 202-233.

Wasserman, S. (2020). Lehninger Principios De Bioquimica / 5 Ed. / Pd. Ediciones Omega.

Los inhibidores reducen la velocidad de reacción

El valor de Km=  micromoles

Entre más pequeño es el valor de Km más afin al sustrato

El valor de 1/2Vmax = 0.4 micromoles/min.

El valor de Vmax = 0.8 micromoles/min.

Se uso un inhibidor no competitivo

OBJETIVOS

Analizar el efecto de la concentración del sustrato sobre la velocidad de la reacción enzimática.

Determinar la constante de Michaelis-Menten (Km) de forma gráfica por los métodos de Michaelis- Menten y Lineweaver- Burk.

Calcular la actividad de la enzima en unidades de invertasa

Realizar los gráficos de velocidad en unidades de invertasa

Determinar el efecto del inhibidor en la actividad de la invertasa

Determinar el tipo de inhibidor sobre la actividad de la invertasa.

Calcular la actividad de la enzima en unidades de invertasa

Analizar el efecto de un inhibidor sobre los parámetros cinéticos de la enzima.

RESULTADOS

ANEXO 1: Cálculos y gráficas para el efecto de la concentración de sustrato sobre la velocidad de reacción.

ANEXO 2: Cálculos y gráficas para el efecto de los inhibidores sobre la velocidad de reacción

Calculo del azúcar reductor

Tubo 1

X = (0.42 - 0.0374)/ 0.1258

X = 3.6359 μ moles

Tubo 2

X = (0.5 - 0.0374)/ 0.1258

X = 4.2718 μ moles

Tubo 3

X = (0.66 - 0.0374)/ 0.1258

X = 5.5437 μ moles

Tubo 4

X = (0.8 - 0.0374)/ 0.1258

X = 6.6565 μ moles

Tubo 5

X = (0.82 - 0.0374)/ 0.1258

X = 6.8155 μ moles

Tubo 6

X = (0.83 - 0.0374)/ 0.1258

X = 6.8950 μ moles

ANEXO 1 (EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO SOBRE LA VELOCIDAD DE REACCIÓN)

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA

PRÁCTICA: EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO E INHIBIDORES SOBRE LA VELOCIDAD DE REACCIÓN

ALUMNOS: CRUZ PLATA DIEGO ALBERTO, RODRIGO DÍAZ CANUTO

GRUPO: 2OV1

CONCLUSIÓN

DISCUSIÓN

De acuerdo con diversas fuentes consultadas, como libro o manuales de laboratorio de otras instituciones, podemos confirmar que nuestros resultados, junto con sus respectivas gráficas son correctos. En la primera parte de la practica se hicieron los cálculos para hacer la gráfica de Velocidad en unidades de invertasa Vs Concentración de sustrato (Gráfica 2).

En nuestra gráfica podemos dividirlas en tres partes: en la primera parte, a bajas concentraciones de sustrato, la velocidad es proporcional a la concentración del sustrato, de tal manera que si se duplica la concentración de sustrato, se duplica la velocidad. La segunda parte de la curva a concentraciones intermedias del sustrato, la velocidad se incrementa menos que en la primera parte. Sin embargo, en la ultima parte de la curva, la velocidad con respecto a la concentración del sustrato reduce drásticamente.

Todo esto se debe a que en nuestros tubos 1,2 y 3, como las moléculas de sustrato son menores que las moléculas de enzimas, las enzimas van a poder transformar el sustrato en productos sin ningún problema, y cuando aumenta la concentración de sustrato las enzimas van a ser capaces de generar mucho más producto; visualmente podemos observarlas en el aumento de la coloración en los tubos.

Sin embargo en los tubos 4, 5 y 6, al aumentar la concentración de sustrato, de tal manera que sea mayor a las enzimas, estas enzimas no van a ser capaces de generar más producto, porque tienen sus sitios activos ocupados; por lo tanto, la velocidad se reduce drásticamente; y visualmente en los tubos no hay una variación significativa en la coloración.

Calculo de la Velocidad enzimática y su inverso

Tubo 1

Vo = 3.6359 μ moles/ 10min.

Vo = 0.36359 μ moles/min                        1/ Vo = 2.7503

Tubo 2

Vo = 4.2718 μ moles/ 10min.

Vo = 0.42718 μ moles/min                        1 / Vo = 2.3409

Tubo 3

Vo = 5.5437 μ moles/ 10min.

Vo = 0.55437 μ moles/min                        1 / Vo = 1.8038

Tubo 4

Vo = 6.6565 μ moles/ 10min.

Vo = 0.66565 μ moles/min                        1 / Vo = 1.5022

Tubo 5

Vo = 6.8155 μ moles/ 10min.

Vo = 0.68155 μ moles/min                        1 / Vo = 1.4672

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