EXTRACCIÓN DE ADN la molécula de la herencia

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UNIVERSIDAD SAN FRANCISCO DE QUITO

EXTRACCIÓN DE ADN

MARIA SOL LLERENA

LUZ ELENA GUACALES

26 DE NOVIEMBRE  DEL 2015

Tabla de contenido

Introducción        

Objetivos        

Procedimiento:        

Materiales:        

Reactivos:        

Resultados:        

Discusiones:        

Conclusiones        

Bibliografía        

Tabla 1- Precipitación del ADN        

Tabla 2 - Extracción del ADN        

Tabla 3 - Reacción Colorimétrica        

Introducción

El ADN también conocido como la molécula de la herencia se compone de 4 pequeñas subunidades llamadas nucleótidos, cada una de estas pequeñas partes  está compuesta de un grupo fosfato, un azúcar llamado desoxirribosa, y una de 4 posibles bases nitrogenadas, entre ellas la adenina, guanina, timina y citosina. (Audesirk, 2008). El ADN  de cualquier especie contiene cantidades iguales de adenina y timina así mismo cantidades iguales de guanina y citosina. (Charff, 1940). El ADN es el tipo de molécula más compleja que se conoce. Su secuencia de nucleótidos contiene la información necesaria para poder controlar el metabolismo de un ser vivo, su estructura puede ser divida en varios niveles, la estructura primaria, secundaria, terciaria y cuaternaria. (Proyecto Biósfera, 2008).

La extracción de ADN se realiza como un paso previo para purificar el material genético o ADN para realizar posteriormente estudios de análisis molecular (pruebas forenses, diagnóstico de paternidad, diagnóstico de enfermedades, caracterización molecular, etc.). El ADN de las frutas o verduras que comemos lo utilizamos por ejemplo para identificar inequívocamente la especie o la variedad de que se trata o incluso los padres del individuo. En la industria alimentaria el ADN se utiliza para detectar posibles fraudes en el caso de que se trate de zumos o de mezclas de carnes o pescado. (Gogorcena, 2013). Muchos estudios de Biología Molecular comienzan con la extracción de ácidos nucleicos. La lisis celular libera las moléculas en una fase acuosa que es separada de los restos celulares por centrifugación. Las proteínas son removidas de la fase acuosa con solventes orgánicos (fenol, cloroformo). El ADN, que permanece en la fase acuosa, precipita junto al etanol y posteriormente es purificado y suspendido en un buffer adecuado. (Malajovich, 2009).

Objetivos

• Extracción del ADN de un alimento mediante un procedimiento simple.
• Separación de las membranas celulares y nucleares por medio de la acción del  detergente, en solución salina, liberando los ácidos nucleicos que precipitan con el agregado de etanol frío.

Procedimiento:

Se empieza preparando una solución de papaína para lo cual se pesó 5gr de jugo de papaya y se disolvió esto en 95ml de agua destilada para elaborar una solución al 5%, esta enzima desnaturaliza las proteínas que puedan estar contaminando el ADN. Aparte se corta una cebolla finamente y se corta un pedazo de , este se colocó en un vaso de precipitación de 150 ml  al que se le añadieron 10 ml de una solución de detergente – sal y se maceró la cebolla con la ayuda de una varilla de vidrio. Se filtró la mezcla anterior en un vaso de precipitación de 150 ml utilizando un colador, este filtrado se pasó y pasó a un vaso de precipitación limpio y a esto se adicionaron 4 ml de jugo de papaya que contenía las enzimas , se agitó el vaso de precipitación para mezclar la solución. Lentamente  y por las paredes del vaso se añadió a la mezcla anterior 10 ml de etanol congelado al 95%, provocando así que se forme una capa en la parte superior de la mezcla de cebolla. Se dejó reposar  la mezcla por 4 minutos. Se observó una estructura de consistencia mucosa entre ambas capas, se introdujo en lo anterior suavemente una varilla de vidrio con un movimiento circular lento para retirar el ADN  que se encontraba en la mitad de ambas capas, este se colocó en un tubo de ensayo y se agregó una solución de cloruro de sodio al 4%, se realiza lentamente y por las paredes del tubo. Se agregaron 5 gotas del indicador rojo de fenol a la solución de ADN el cual se torna de color rosado oscuro en presencia de ADN.[pic 2]

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