Efecto De Las Dietas

Efecto de las dietas sobre la proliferación de células C6 y líneas de células de tumores gliales humanos

Para examinar los efectos de DSA sobre la proliferación celular de glioma, el número de células se contaron después de la adición de DSA. Una μ M de DSA inhibió casi completamente la proliferación de células C6 (Figura 1A ). Después de 120   h, el número de control de las células C6 aumentó 28,9 veces ( Figura 1A , diamantes), pero las células DSA-tratadas aumentó sólo 1,14 veces ( Figura 1A , triángulos). DSA suprimieron la proliferación C6 en una manera dependiente de la dosis ( La Figura 1B ). Después de 24   h, el número de células C6 cultivadas sin DSA aumentó 2,6 veces. Los valores correspondientes de las células C6 tratadas con 250   n M, 500   n M, y 1   μ M de DSA fueron 1.4, 1.2 y 1.1, respectivamente. Se confirmó los resultados mediante un método diferente. Desde 5'-bromodesoxiuridina (BrdU) incorporación de astrocitos en cultivo con 1   μ M de DSA que contiene el medio durante 12   cultura h se redujo a 4,3% en comparación con el DSA control libre, llegamos a la conclusión de que la síntesis de ADN fue suprimido sorprendentemente por DSA.

Después de 24   h de exposición a DSA, el medio se reemplazó con medio libre de DSA. A pesar de la eliminación de DSA, las células continuaron proliferando a la misma velocidad lenta ( Figura 1A , cuadrados).Por lo tanto, el efecto de las dietas sobre la proliferación C6 era irreversible y no una respuesta temporal.Estos resultados sugirieron que DSA actuó en una etapa temprana de la proliferación celular.

Para determinar si el efecto inhibidor de las dietas sobre la proliferación celular se limita a las células C6, hemos examinado el efecto de las dietas sobre la proliferación de cuatro células tumorales gliales humanos (U251, SF-539, SNB-75, y SNB-78). La exposición de cada una de estas células de tipo 1   μ M de DSA de 1   h reduce su tasa de crecimiento a 14% ~ 49% de la del control ( Figura 1C ). En estas condiciones, la tasa de crecimiento de las células C6 reducirse en más del 90%. Estos resultados sugirieron que DSA fue eficaz en todos los tipos de células de glioma.

La inducción de cambios morfológicos de los gliomas por DSA

Para evaluar los efectos morfológicos de DSA, se analizaron las células C6 tratadas con o sin DSA por microscopía ( Figura 2A, B ). Células C6 tenían una morfología epithelioidal plana ( Figura 2A ), pero después de la adición de las dietas, la mayoría de ellos se convirtieron en los astrocitos con muchos procesos largos, delgados y bien desarrollado y ampliado radialmente ( Figura 2B ). Las longitudes de algunos procesos superaron 200   micras. En ausencia de DSA, la mayoría de las células se han aplanado y en forma de huso y ninguno de ellos tenía proceso delgada ( Figura 2A ). Puesto que se sabe que los astrocitos bien diferenciados tienen una forma estrellada y muchos procesos largos ( Butt, 1991 ), los presentes resultados indican que DSA causado células C6 para entrar en el estado diferenciado.

Cuando se examinó el efecto de las dietas en los cambios morfológicos de las células tumorales gliales humanos, la mayoría de ellos cambiaron su forma como sigue. Células U251 fueron una morfología epithelioidal plana ( Figura 2C ). Después de la adición de DSA, la mayoría de ellos cambiaron a una forma estrellada (Figura 2D ). En el caso de SNB-75, las células se alargaron en comparación con C6 o U251 pero aplanadas (La Figura 2E ). Después de la adición de la DSA, cambiaron a una forma estrellada, con procesos bien ramificados ( Figura 2F ). La morfología de las células SNB-78 fue similar a la de SNB-75 antes de la adición de DSA ( Figura 2G ), pero las células del GEN-78 cambiaron de manera diferente a una forma estrellada con los procesos ramificados largos pero menos que las células del GEN-75 después de la adición de la DSA ( Figura 2H ). Estos resultados indicaron que el DSA indujo a los cambios morfológicos de las células tumorales gliales de la forma aplanar epithelioidal a la forma estrellada que lleva dos o más procesos delgadas. Se ha informado de que tal morfología de las células estrelladas es una de las características de los astrocitos diferenciados (Bovolenta et al, 1984 ; Butt, 1991 ).

El aumento de expresión de GFAP después de la adición de DSA

La malignidad de los gliomas se correlaciona inversamente con el contenido de proteína específico de astrocitos de filamentos intermedios (GFAP) ( Tascos et al, 1982 ). Por otra parte, los astrocitos maduros se caracterizan por la expresión de una gran cantidad de GFAP ( Tascos et al, 1982 ; Chiu y Goldman, 1985 ).GFAP se expresa exclusivamente en los astrocitos y el nivel de expresión aumenta durante la diferenciación.Se encontraron células C6 para producir sólo una pequeña cantidad de GFAP debido a sus propiedades malignas ( Messens y Slegers, 1992 ). La inmunotransferencia en La Figura 3 muestra claramente que la expresión de GFAP fue mayor después de la adición de DSA. Una evaluación densitométrica de la blot indicó que la cantidad de GFAP después de la adición de DSA aumentó más de cien veces en relación con la cantidad en las células de control. Los valores correspondientes de las líneas celulares tumorales gliales humanos eran más de 12,2 veces. Astrocitos diferenciados se caracterizan por una morfología de las células estrelladas, aumento de la expresión de GFAP, y se inhibe la proliferación ( Butt, 1991 ; Bovolenta et al, 1984). Llegamos a la conclusión de que las células C6 y líneas de células de tumores gliales humanos fueron inducidas a diferenciarse por DSA.

Especificidad lectina de efecto inhibidor sobre la proliferación C6

DSA se une específicamente a glicanos que contienen multiantennary y / o N-acetil-lactosamina unidades de repetición ( Cummings y Kornfeld, 1984 ; Yamashita et al, 1987 ). Por lo tanto, era de interés para determinar si otras lectinas de plantas, que poseen diferentes especificidades de unión a carbohidratos, pueden inhibir

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