Electroforesis

INTRODUCCIÓN:

Los plásmidos son moléculas de DNA extracromosómico, circular y generalmente de pequeño tamaño que se encuentran en muchas especies bacterianas y que se pueden replicar de manera independiente del DNA cromosómico. A diferencia de éste, los plásmidos no son necesarios para la viabilidad general de la célula, pero pueden contener genes que contribuyen a la supervivencia en condiciones especiales, como los que confieren resistencia a antibióticos, a metales etc. Algunas clases de plásmidos poseen además la propiedad conocida como "replicación relajada", esto es, están presentes en forma de muchas copias por célula, lo que facilita enormemente su aislamiento y purificación.

OBJETIVOS:

• Obtener DNA plasmídico a través de la bacteria E. coli.

• Realizar electroforesis en gel de agarosa.

• Discutir sobre las formas moleculares obtenidas.

RESULTADOS:

El pozo número 3 fue el analizado en esta práctica.

Los resultados obtenidos reflejan que trabajar con el plásmido no fue el más correcto, ya que según la bibliografía consultada debimos obtener cuatro líneas claramente separadas, que reflejarían al plásmido en sus formas: súper enrollado en la primera línea, en la segunda lineal, la tercera lineal y en la cuarta RNA restante.

DISCUSIÓN:

Claramente no se puede observar alguna diferencia porque no se trabajó correctamente con el plásmido, este no fue tratado correctamente, y por eso no se pueden diferenciar correctamente; lo que sí se puede observar de manera un poco más clara es el RNA al final.

En la práctica se llevó a cabo una electroforesis. La electroforesis es un método analítico basado en el hecho de que una molécula cargada en solución se mueve dentro de un campo eléctrico en dirección de un electrodo determinado. Los polímeros de interés biológico adquieren carga eléctrica superficial cuando están suspendidos en medios polares, por ejemplo los ácidos nucleicos, proteínas, aminoácidos, hormonas, etc. Debido a sus características de tamaño y carga.

En este caso las moléculas que se querían analizar fueron los plásmidos, los cuales se corrieron en gel de agarosa.

Los plásmidos son moléculas de ADN, los cuales se replican independientemente del cromosoma bacteriano, estas al ser purificadas, pueden tener conformaciones diferentes, como son: súper enrollada, relajada o lineal, claramente son diferentes en su forma, y volumen, por lo cual tendrán una distinta movilidad electroforética. La estructura retorcida del plásmido se debe a la enzima girasa, esta permite que el plásmido se compacte ocupando menor cantidad de volumen en el espacio. En las tres formas tienen la misma longitud, y la misma masa molecular, pero distinta conformación y así un volumen efectivo distinto. Siendo así, las de estructura súper enrollada son más compactas su volumen es menor, se mueven con mayor facilidad en el gel y por eso las encontraremos más lejos del punto de origen; en cambio las lineales avanzarán de manera más lenta dentro del gel de agarosa, pero avanzarán más rápido que las relajadas, aun así correrán menos en comparación con las súper enrolladas; las que tengan la forma relajada, les costará más trabajo pasar dentro del gel y también su velocidad será menor que las anteriores, por eso serán encontradas cerca del origen.

También al final, se pueden encontrar moléculas de RNA, las cuales por su estructura avanzarán más y estarán más lejos del punto de origen.

CONCLUSIÓN:

ANEXOS:

Bromuro de etidio

Agarosa

Tipos de RNA:

Heterogeneo nuclear RNAhr

Ribosómico RNAr

Pequeño nuclear RNAsn

Mensajero RNAm

Transferente RNAt

Vírico

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