Extraccion De Antibiotico

AISLAMIENTO DE BACTERIAS PRODUCTORAS DE ANTIBIÓTICOS DE MUESTRAS DE SUELO DEL PULULAHUA, TUMBACO Y PARQUE DE LA CAROLINA.

PROYECTO DE INVESTIGACIÓN

PARTICIPANTES:

DIANA RENDÓN

PAUL SOTAMINGA

NATHALIA RODRÍGUEZ

ESTEFANÍA ALMEIDA

PROFESOR GUÍA:

CARLOS BANCHÓN

QUITO 20 DE ENERO DEL 2012

Aislamiento de bacterias productoras de antibióticos de muestras de suelo del Pululahua, Tumbaco y Parque de la Carolina

Resumen.

La obtención de una cepa de bacterias productoras de antibióticos a partir de una muestra de suelo se da mediante diferentes protocolos. Las muestras de suelo son provenientes del cráter del Pululahua, del valle de Tumbaco y del Parque de la Carolina de la ciudad de Quito, son muestras de tierra de ecosistemas que no han tenido un excesivo contacto con el ser humano ya que corresponden a áreas verdes o parques del sector del cantón Quito por lo que se pudo aislar cepas puras de microorganismos pertenecientes al género Streptomyces, entre estos se espera aislar específicamente las cepas que sean productoras de antibióticos. Por el momento se ha efectuado un protocolo de aislamiento de estas bacterias únicamente con muestras de tierra del Pululahua, no se han obtenido los resultados deseados, aunque se han obtenido bacterias en gran cantidad ninguna de estas se ha identificado como miembro del genero Streptomyces y tampoco como productora de antibiótico, motivo por el cual se modifico el protocolo para la extracción de estas muestras ya que el factor temperatura puede ser un causante de la ausencia de los microorganismos de interés. Las pruebas de aislamiento con las muestras de tierra del valle de Tumbaco y del Parque de la Carolina se realizaron bajo los mismos parámetros de aislamiento ya utilizados y mediante el protocolo modificado, de esta manera se pensó fue posible obtener las Streptomyces, sin embargo se efectuaron las puebas para determinar si eran productoras de antibióticos y dieron resultados negativos, por el momento no se ha podido determinar con certeza absoluta si en estos suelos viven bacterias productoras de antibióticos o bien determinar que los suelos analizados no poseen este género de microorganismos en su microbiodiversidad. Este estudio es importante ya que de lograr determinar la existencia de las bacterias en cuestión y conseguir su crecimiento adecuado en un biorreactor el protocolo podría ser una alternativa interesante y útil en la producción de antibióticos a gran escala ya que representaría una disminución en costos de producción del antibiótico y obtención de la bacteria.

Introducción

El descubrimiento de los antibióticos tuvo y mantiene importancia y, hasta la actualidad, se encuentran nuevos tipos. En el país, la industria de antibióticos todavía depende de importaciones y en este respecto hacen falta proyectos de impulso a la industria nacional de producción de antibióticos. Los antibióticos se caracterizan por tener un origen bacteriano (a diferencia de un quimioterápico, cuyo origen es químico) (Romero, 2007 p. 50), es necesario establecer protocolos eficaces para obtenerlos.

En el presente trabajo se plantea el aislamiento de cepas puras de microorganismos productoras de antibióticos. En la actualidad, se han encontrado más de 2000 cepas productoras en estudios con suelo (Tortora, 2007. p. 256). De este modo, se espera conseguir cepas adecuadas a partir de muestras de suelo de la ciudad de Quito. Para incrementar la posibilidad de éxito, y tener una relación de contraste, se empleará la muestra de tres suelos, correspondientes al cráter Pululahua, el Parque de la Carolina (Quito) y Tumbaco.

Se espera encontrar Streptomyces, uno de los géneros de bacterias que se aíslan con mayor frecuencia del suelo. Este género, con alrededor de 500 especies ya descritas, es productor de la mayoría de antibióticos comerciales (V. tabla 1, fuentes representativas de antibióticos) (Tortora, 2007. p. 335, 528). La comprobación del efecto antibiótico se completará con la exposición de B. subtilis a las bacterias aisladas. Se espera la inhibición de B. subtilis y la presencia de halos de inhibición de Streptomyces.

Objetivos

Objetivo General

Aislar bacterias formadoras de antibióticos

Objetivos Específicos

- Establecer un protocolo de aislamiento de cepas puras a partir de muestras de suelo de la ciudad de Quito.

- Establecer un protocolo de comprobación de la acción de las bacterias productoras de antibióticos.

- Determinar característica principal cualitativas propias de las cepas productoras ( halo de inhibición).

Materiales

Para el aislamiento de las cepas se utilizaron cajas petri, asas de inoculación, tubos de ensayo, pipetas, incubadora. Las muestras de suelo fueron obtenidas del cráter Pululahua, Tumbaco y Parque de la Carolina. Se empleó también agua destilada, etanol 10% v/v y como medios de crecimiento agar nutritivo y caldo nutritivo.

Metodología

Se tomó una muestra de suelo de aproximadamente 5 g y se disolvió en 10 mL de agua destilada. Se añadió 0,5 mL de etanol 10% v/v, se reposó la muestra por 15 minutos y luego se inoculó utilizando la siembra por extensión en 4 cajas por muestra. Luego se dejó dos cajas sin inoculo para el control. Las muestras se incubaron por 3 días a 37°C. Se observó crecimiento en las cajas incubadas y se inoculó en caldo nutritivo para su crecimiento por 24 horas a 37° C. Para la comprobación de la actividad inhibidora, se inoculo por extensión las cajas con las bacterias aisladas y muestras de B. subtilis, se inoculó a 37 °C de 24 – 48 horas, se observó el crecimiento y la aparición del halo de inhibición. Las colonias productoras del halo de inhibición se aislaron en caldo nutritivo en tubos de ensayo para su reproducción. Se empleó el etanol con el fin de aislar las bacterias productoras de antibióticos, dado que éstas

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