Extraer y separar diversos compuestos contenidos en un producto natural mediante métodos y técnicas convencionales

[pic 1][pic 2][pic 3][pic 4]

Resumen

Objetivo General:

Extraer y separar diversos compuestos contenidos en un producto natural mediante métodos y técnicas convencionales

Objetivos Específicos:

1. El alumno extraerá el compuesto o compuestos de un producto natural por técnicas de extracción solido – líquido y liquido-liquido.
2. El alumno separará e identificará mediante las técnicas de cromatografía en capa fina y columna los compuestos aislados del producto natural.

Material:

Reactivos:

Material que el alumno traerá:

Un pliego de papel filtro.

Un rollo de papel aluminio

Un frasco de vidrio que quepa un portaobjetos verticalmente y angosto.

Diez frascos para las cámaras de lución.

Dos frasco de boca ancha color ambar.

Una bolsa de sal fina

Encendedor

Procedimiento:

1. Primero con el chile guajillo se va a trozara lo mas que se pueda hasta formar 20 g de chile guajillo, después en frasco color ambar agregar 50 ml de acetato de etilo.
2. Con la espinaca se va cortar el tallo y el corazón de las hojas, después de formar 25 g de espinaca se procederá a macerarlo con el mortero y el pistilo. Cuando este casi hecha pure agregarle un poco de  etanol solo para poder seguir macerando.
3. Montar el soporte universal  con el anillo, después de haber macerado la espinaca agregarlo al embudo de separación, medir 30 mL de hexano en un matraz aparte, cuando ya este todo liso, verter el hexano al embudo de separcion, taparlo y revolver de tal manera que la punta este hacia arriba en diagonal , agitar constantemente y abrir la manija poco a poco para igualar las presiones, cuidando que no se salgo el tapón del embudo de separación.
4. Una vez hecho esto esperar que repose un minuto o hasta que se vea como se separa en fases , aproximadamente tienen que ser tres fases, ya que se separe la fase se hasta arriba va a ser la clorofila y el gabazo ósea el extracto pero la de abajo es el hexano, entonces usando las técnicas convencionales de extracción , únicamente hay que separar el hexano y la clorofila en un recipiente color ambar.

[pic 5]

1. Una vez separado del embudo de separación la clorofila, repetir el mismo proceso otras tres veces. 1) poner 30 mL de hexano, 2) tapar revolver igualar presiones 3) destapar dejar reposar, y separar X3.

1. Colar el extracto para separar la clorofila y el gabazo con un embudo y algodón .

1. Guardar todo la clorofila en un frasco ámbar y  agregar suficiente sulfato de sodio para deshidratar la extracción (quitarle toda el agua), se considera suficiente cuando el sulfato de sodio se mueve libremente.

1. Repetir el paso 6 pero con el chile guajillo y guardarlo en un frasco ambar.

Preparación de Placas de Cromatografia de Capa Fina:

1.  En el frasco donde cabe un portaobjetos que se pidió anteriormente, agregar un poco mas de ¾ de acetato de etilo y agregar un cantidad generosa de silica de gel de capa fina.
2. Agitar moderadamente y ver que a consistencia este ni tan aguada ni tan sólida. Si esta muy aguada poner mas silica de gel si esta muy liquida poner mas silica de gel.
3. Sacar un parrilla y Precalentar la estufa a 150 ºC
4. Para prepara las placas de capa fina poner dos porta objetos limpios alineados en vertical y sumergir, sosteniéndolos en todo momento y sacarlos cuidadosamente y ponerlos sobre  un papel aluminio, preparar unas 16 placas.
5. Como consejo y advertencia no dejar despatado la mezcla porque se evapora.
6.  Una vez hecho esto y teniendo nuestras 16 placas colocaras sobre una parrilla y ponerlas en la estufa a 200 ºC  por 15 min para activarlas.
7. Por ultimo sacar las placas y dejarlas enfriar.

Preparación de las cámaras de lución.

1. Lavar los diez frascos designados para las cámaras también de no olvidar de lavar las tapas, después secarlos bien.
2. Cortar a la medida rectángulos de forma que quepa dentro de los frascos y o rodeen dejando un espacio que se pueda ver como se desplaza los pigmentos.

[pic 6]

1. Una vez hechos los 10 frascos  con sus papeles filtro respectivos, poner 5 mL de cada disolvente en cada uno de los frascos.

1. Ponerlos de mayor a menor polaridad.

      Tabla de disolventes por orden de polaridad

Preparación de los Capilares:

1. Con ayuda de otra persona, poner verticalmente la flama del encendedor, mientras el otra persona agarra el capilar con las dos manos de ambos extremos y lo acerca a la flama , y lo va rodando con el pulgar y el índice de ambas manos, e ir separando poco a poco, hasta que quede muy fino.
2. Repetir este paso hasta que salga y se formen unos 4 capilares.
3. Romper la punta con unas pinzas y comprobar que pase el disolvente, solo tiene que quedar unas cuantas gotas.

Técnica de punteo:

1. Teniendo nuestras capas finas seleccionar dos que no estén tan bonitas y esas usarlas para practicar.
2. El punteo tiene que estar por lo menos a un centímetro de la base y no tan cerca de los bordes, van a ser dos punteos a la misma distancia y con la misma cantidad de extracto. El tamaño ideal dependerá del capilar pero tiene que ser visible y sin dañar la placa.

CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA:

1. Primera parte.

1. Teniendo todo lo anterior podemos comenzar, después de puntear 10 placas de capa fina , de un lado el extracto de espinaca y del  otro el chile guajillo. Ponerlas de dos en dos en las cámaras de lución.
2. De dos en dos ¿porque?, para ver cómo se desplaza y se separan los pigmentos. Y vigilar que NOTA  sacar unos cuantos milímetros antes de que disolvente pase el borde o el limite la capa fina.

[pic 10]

1. Colocarlas en un papel para después comparar resultados y medir su Rf
2. Hacerlo  para cada disolvente.
3. Al tener nuestras placas ya secas, ver con que disolvente se separó mejor y medir su Rf.

IMAGEN 1

1. Segunda parte

1. Preparar 10 pacas en capa fina más y activarlas.
2. Preparar estas disoluciones en otros diez frascos  y repetir el proceso de 1) lavarlos 2) secarlos 3) poner la cantidad correspondiente indicada 4) recortar rectángulos de papel filtro a la mediad como anteriormente se había pedido.

1. Puntear las placas de capa fina ya activadas con el extracto de chile guajillo.
2. Ponerla de dos en dos y estar vigilando que o se pase el disolvente.
3. Ponerlas en un papel acostadas y ver cual separo más los pigmentos.
4. Repetir estos mismos pasos pero para el extracto de espinaca pero ahora con estas cantidades.

1. Posteriormente anotar cual fue la proporción adecuada que separo mejor los pigmentos.

Preparación de CROMATROGRAFIA EN COLUMNA.

Material.

Procedimiento:

1. Para hacer la cromatografía en columna se necesita primero montar el soporte universal con las pinzas de tenazas.
2. Primero se va hacer con el extracto de chile guajillo: con el éter de petróleo verter con ayuda del  embudo a la bureta uno chorro de éter, teniendo abierta la manija de  la bureta y un matraz abajo, para limpiar la bureta.
3. Con un pedazo de algodón pequeño no mas grande que la boca de la bureta meterlo con ayuda del alambre hasta donde empieza la parte mas angosta de la bureta NO mas allá.
4. Agregar éter de petróleo  un poco mas de la mitad de la bureta porque se va a empezar a evaporar, asi que se tienen que ser rápido.
5. Agregar en el matraz bola  25 g de silica de gel para columna, y ponerle éter de petróleo rebasando la silica y verterlo a la bureta con ayuda del embudo.
6. Como toda la silica no se va a pasar , verter directamente a la bureta, si se llena vaciar la bureta para seguir con un poco mas de la mitad.
7. Con el alambre limpio revolver al estilo huevos revueltos, cuidadosamente y ver que quede homogéneo.  
8. Siempre ver que quede unas cuantas rayitas el éter por encima de la silica de gel.
9. Colocar 1.5 cm de sal fina.
10. Con la cromatografía de capa fina anterior se seleccionó la proporción que separo mejor el chile guajillo: esta fue 2 ml de eter de petróleo + 8 mL de Cloroformo.
11. Hacer una disolución con esas mismas proporciones pero de 100 a mL
12. Una vez hecho esto ver que la sal este totalmente plana la superficie, después tener una rayita por arriba de éter de petróleo , y agregar  5 ml de pigmento con una bureta cuidando que no embarre las paredes.
13. Con otro bureta verter la solución 2:8
14. Abrir la manija de la bureta hasta que se vea que se esta empezando a separar los pigmentos, seguir agregando la solución 2:8 (NUNCA DEJAR SECAR).
15. Cuando este apunto de llegar a la parte de abajo el primer extracto poner un tubo de ensayo de tal manera que se recarga en la bureta y no se caiga.
16. Medir un mL en un tubo de ensayo, esa es la medida con la que se van a llenar todos los tubos de ensayo
17. Cuando se vayan llenando ponerlos en la gradilla
18. Tomar las notas correspondientes

Con espinaca:

1. Repetir exactamente los pasos anteriores pero ahora agregar la clorofila y la solución va hacer 40 % de acetato de etilo + 60 % de éter de petróleo en una solución de 100 mL
2. Igual tomar las notas correspondientes

SEGUNDA PARTE:

1. Preparar 40 placas de capas fina y activarlas.
2. Hacer 40 capilares
3. Del lado izquierdo de la placa fina puntear usando el extracto original de los respectivos extractos ( chile guajillo y clorofila)
4. Del lado derecho puntear usando la cromatografía en columna pero, un capilar por un tubo de ensayo, en los dos extractos.

[pic 11]

1. Una vez terminado con  las placas  , hacer nuevamente una cámaras de elución  pero ahora usando el disolvente que quedo de las proporciones (2:8) y (4:6)
2. Cuidar que o se pase el diluyente y dejarlas secar
3. Anotar su Rf y los resultados

Resultados.

Cuando se escogio la proporción en donde mejor separo los carotenoides.

En este caso fue la proporción (2:8)

[pic 12]

Esta es la proporcion que se eligio de (4:6)  en el caso de la clorfila.

[pic 13]

Separacio de los diferntes tipos de carotenoides en el extracto de chile guajillo por medio de cromatografia en columna

...