LABORATORIO III “OBSERVACIÒN DE PROCARIONTES: MORFOLOGIA Y TINCIÒN”

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LABORATORIO III

“OBSERVACIÒN DE PROCARIONTES: MORFOLOGIA Y TINCIÒN”

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INTEGRANTES        :

INDICE

HIPOTESIS …………………………………………………………. …3.-

INFORME DE LABORATORIO  …………………………………4 A 6.-

VENTAJAS Y DESVENTAJAS …………………………………….7.-

TINCION A GRAM 100X..……………………………………….. 8.-

FUNDAMENTOS DE LA TNCION DE GRAM………………9.-

PASOS CLAVES EN LA TINCION DE LAS MUESTRAS….11.-

OBSERVACIÓN DEL MICROORGANISMO………………….12.-

CONCLUSION…………………………………………………………..14.-

BIBLIOGRAFIA………………………………………………………….15.-

HIPOTESIS

Dentro  de nuestro práctico de tinción Gram, esperamos obtener dos resultados  diferentes, las que clasificaremos o daremos nombre según el resultado obtenido; nombraremos como  bacterias  GRAM POSITIVAS, a aquellas que tomen un color o tono azul- violeta y GRAM NEGATIVAS, a aquellas bacterias que su color será rosa- rojo, cabe agregar que las tinciones tienen este nombre debido a la capacidad o incapacidad de penetración en la célula. Uno de los primeros pasos a realizar será fijar las bacterias en un portaobjetos, para así no poder perder la adherencia de estas con los pasos próximos a seguir. En ambos procedimientos utilizaremos los mismos productos, pero su secuencia de aplicación será  muy diferente.

Además de las tinciones anteriores realizaremos otro tipo llamada  de TINCION ESPECIALIZADA., en este tipo de tinción se espera observar estructuras internas del microorganismo, debido a que no se  tiñen de una forma óptima  o correspondientes con las técnicas antes mencionadas.

Los resultados que esperamos obtener de esta tinción, será poder visualizar claramente a través del microscopio estas bacterias, ya que sin estos métodos, no se pudieran observar, debido a que son transparentes, permitiendo de esta forma realizar un opuesto hacia su alrededor.

Realizaremos la tinción según lo indicado por el profesor de la clase correspondiente, y de esta manera poder obtener los resultados  esperados.

INFORME DE LABORATORIO

OBSERVACION BACTERIANA:

Tinción de Gram  Positivo:  (esporas)

1. TINCION DE BACTERIA GRAM +

Bacteria utilizada desde medio solido: Bacillus Subtiles.

Desde colonia en medio solido.

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Se desinfecta el área de trabajo con etanol por método de arrastre, se enciende el mechero bunsen y se obtiene la llama segura para trabajar sobre ella, procurar tener todos los materiales a mano y no alejarse del perímetro de esterilidad para así no alterar los resultados de las muestras, se rotula la placa de Petri.

-  Se agrega una gota de agua destilada al porta objeto, flamear el asa de loop, enfriar y tomar una pequeña muestra del inoculo basillus septillis  y homogenizar.

- Tomar el porta objeto cubrir con papel filtro y agregar el colorante verde de malaquita, con la pinza de madera y flamear de manera intermitente para no carbonizar la muestra, el objetivo es que el colorante se adhiera a la muestra y quede fija al portaobjeto.

- Por último se le agrega el colorante de contraste Safranina, una gota por treinta segundos, lavar con agua corriente y secar en el mechero bunsen de manera intermitente asta vaporizar la muestra.

- Antes de observar en el microscopio se le debe agregar una gota de agua destilada al porta objeto para fijar la cubierta de este.

- Se aplica una gota de aceite al cubre objeto y se lleva al objetivo mayor (100 x).

RESULTADO: Se observan esporas verdes.

OBSERVACIÓN BACTERIANA GRAM +

Resultados: Se Observan esporas verdes.

Tinción de Gram Negativa: Proteus mirabilis  (Basilo)

1. TINCION DE BACTERIA GRAM -

Bacteria utilizada desde medio solido: Proteus mirabilis.[pic 6]

Desde colonia en medio solido preparamos un frotis bacteriano

1. Primeramente preparamos el lugar de trabajo empleando técnica aséptica, desinfectamos con etanol el área que ocupamos y luego procedimos a prender  el mechero con flama azul para poder esterilizar el asa de loop que se ocupó para obtener un inoculo de la muestra.

2. Reunimos todo el material y colocamos en un portaobjeto limpio una gota de agua destilada, con un asa curva tomamos un inoculo de la muestra Proteus mirabilis, (siempre utilizando el método de esterilidad antes de tomar y ocupar el asa, teniendo precaución de cerrar la placa de muestra).

3. Mezclamos la muestra con el agua destilada con movimientos circulares suaves y luego extendimos sobre el portaobjetos.

4. Luego nos dispusimos a realizar este proceso que fue descrito y explicado en taller por los profesores, cabe destacar que en cada intermedio del proceso había que hacer un lavado por arrastre teniendo cuidado con la muestra y visualizamos en el microscopio óptico para ver ambos  resultados de las muestras.

Vemos la imagen de la colonia bacteriana de Proteus mirabilis  y fotografía del resultado en un microscopio óptico, la morfología bacteriana seria bacilos cortos, (por lo que averiguamos este tipo de bacteria posee además flagelos, los cuales en la imagen no es posible observar).

Bacteria utilizada desde medio solido: staphylococcus epidermidis

- Se desinfecta el área de trabajo con etanol por método de arrastre, se enciende el mechero bunsen y se obtiene la llama segura para trabajar sobre ella, procurar tener todos los materiales a mano y no alejarse del perímetro de esterilidad para así no alterar los resultados de las muestras, se rotula la placa de Petri.[pic 7]

-  Se agrega una gota de agua destilada al porta objeto, flamear el asa de loop, enfriar y tomar una pequeña muestra del inoculo S. epidermis y homogenizar.

-  Se coloca la muestra en el porta objeto luego se toma con la pinza de madera y se flamea de manera intermitente para no carbonizar la muestra, el objetivo de esto es evaporar el agua para que la muestra quede fija al porta objeto.

-  Aplicamos la tinción con Safranina de manera que no quede ninguna porción sin teñir, el colorante debe actuar por lo menos un minuto.

-  Se lava la preparación para eliminar el exceso de colorante, se inclina el porta objeto y se aplica agua corriente de manera que resbale por el porta objeto.

-  Seque el porta objeto mediante calor suave.

-  Muestra lista, se puede observar en microscopio.

• RESULTADO: Permite la visualización la concentración, morfología y el modo de agrupación bacteriana.

VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LAS TECNICAS DE TINCION:

Por todo esto las ventajas de las técnicas de tinción son: 

• Permite diferenciar distintos tipos morfológicos
• Establecer una información complementaria sobre usos de estructuras internas y/o externas.
• Conocer sus características tinto riales orientándonos hacia un grupo taxonómico para la clasificación de las bacterias.

FACTORES QUE AFECTAN A TODA TECNICA DE TINCION

Las técnicas de coloración constituyen una práctica diaria en el laboratorio de microbiología por los cuales se deberá considerar una serie de factores que puedan alteras los resultados de los mismos. Así pues los principales factores son:

• Pureza del colorante.- a mayor grado de impurezas mayor error y menor calidad de tinción.
• Concentración del colorante.- a mayor concentración mayor error en la tinción; igual que a menor concentración.
• Conservación del colorante.- se debe conservarse en lugares frescos, secos, y obscuros; envasados y etiquetados.
• Técnica Empleada.- se deberá seguir rigurosamente paso a paso cada técnica de tinción.
• Temperatura.- en la mayoría de los casos se utiliza la temperatura ambiental pero si existe algunas técnicas que requieran de temperatura adecuada.
• Cantidad de la muestra.- deberá ser representativa y homogénea pero no muy grande.
• Realizar correctamente el frotis.- se debe fijarse bien para que cuando se les añada los colorantes mordientes y decolorantes no arrastren a los microorganismos que se desee observar.
• Soluciones mordientes.- en ciertos casos son necesarios ya que actúan como fijadores y ayudan a la fijación del colorante a las correspondientes estructuras.

Tiempos de Tinción.- es necesario que todas las sustancias se mantengan en la preparación un tiempo preciso y variable según la tinción

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