Mecanismos de resistencia adquirida del microrganismo

 Antibiograma

Introducción

El antibiograma es una prueba de sensibilidad, la cual nos va a permitir ver el comportamiento de la bacteria frente a los antibióticos que se van a elegir para el tratamiento del paciente. Por lo tanto,  tenemos que acordarnos del componente del antibiograma y eso aplicarlo al control de la resistencia bacteriana.

A pesar que desde hace muchos años se empezaron a detectar y a especificar los primeros brotes de resistencia  a antibióticos de algunos géneros y especies de bacterias. Y se reporto mas o menos desde 1990 que hay problemas con ciertos microorganismos intrahospitalarios que eran ya resistentes a muchos antibióticos. Solo hasta el 2011 este tema fue protagónico en lo dicho por la OMS en donde se mencionó  que había  que combatir la resistencia a medicamentos. Si no se actúa hoy, no habrá cura mañana. Lamentablemente ya hemos llegado al punto que desde hace un año se reporto la primera echerichea Coli resistente a Colestina.

Esta resistencia a medicamentos esta asociada a múltiples factores, desde haya una débil vigilancia a nivel de los hospitales, que haya una calidad pobre en la formulación de los medicamentos y el uso indiscriminado de estos.

Se debe de partir de que para llegar a un antibiograma primero hay que hacer la identificación del microrganismo. Esto se hace  a partir de una muestra optima clínica  del paciente que contenga los microrganismos, a la cual se hacen pruebas  para su identificación: microscópicas (para bacteriología la prueba reina es la coloración de Gramm, coloración de ziehl nielasen)  bioquímicas, etc. Entonces antes de combatir la bacteria  y  hacerse pruebas de sensibilidad (antibiograma) se debe de identificar la bacteria.

Las pruebas de sensibilidad nos van a permitir ver el comportamiento puntual  de la bacteria identificada ya en genero y especie ante X antibiótico. De allí que todo el proceso tiene tiempos de identificación y de oportunidades.

Hay otras pruebas que nos permiten ver no solamente por colimetria sino también por desplazamiento de proteínas, las cuales nos permiten identificar genero y especie. A pesar de que esta metodología es mas rápida que las convencionales debido a que en dos horas se puede identificar un microrganismo, hasta la fecha esta metodología aun no se ha logrado desarrollar para evaluar la respuesta bacteriana a los antibióticos.

Contamos también con las  pruebas moleculares en las que  a partir de una muestra clínica se va a determinar si la bacteria  X ( ej. micobaterioun tuberculosis) tiene un gen que mute para la respuesta a la rifampicina.

Existen otras pruebas estandarizadas  como es la detección de staphylococcus aureus meticilino resistente. Identificar este microrganismo o en general identificar la resistencia de las bacterias a los antibióticos es importante porque: puede haber falla terapéutica, puede haber una alta probabilidad de desimanación.  

Antibiograma:

Como se hacen las pruebas de sensibilidad  in vitro de respuesta antimicrobiana:

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Pruebas/ métodos de sensibilidad antimicrobiana:

• Método de difusión por disco → resultados cualitativos. En el resultado se expresa que la bacteria que se le encontró a ese paciente va a ser  sensible o resistente a determinados antibióticos. En los resultados  se obtiene un diámetro de inhibición → ese circulo se compara con unos rangos
• Método de épsilon-test o E-test → tiene un resultado tanto cualitativo como cuantitativo.  
• Métodos de dilución (macro o microdilución): se usa mas en procedimientos de investigación.  Da resultados cualitativos y cuantitativos.

Los métodos de dilución y de E-test nos va dar un resultado tanto cualitativo como cuantitativo. Cualitativo porque nos va a dar la caracterización entre sensible y resistente. Y cuantitativo porque  estos métodos arrojan un dato llamado concentración inhibitoria mínima  (CIM).

La CIM es la concentración de antibiótico mas baja que permite inhibir el 99% de la población bacteriana in vitro. → dicha cantidad de extrapola al paciente y se espera que inhiba el mismo porcentaje en el paciente. Hablamos de población porque la bacteria se esta replicando constantemente.  

Procedimiento:

Para reflejar estas características se deben utilizar metodologías como las del antibiograma.  

•  Se parte de una muestra clínica que contenga los microorganismos a estudiar  
• se hace una suspensión bacteriana o inoculo bacteriano en una solución esteril
• el microrganismo crece en la suspensión → la concentración de la bacteria en la suspensión debe de alcanzar un estándar optimo. → se debe de  llevar a una concentración de 1.5 x 10 a la 8 unidades formadoras de colonias porque es la concentración que se estima que una bacteria alcanza en un hospedador cuando le esta haciendo daño.  
• La solución con las bacterias  se siembra en un cultivo (contiene cationes y otros componentes)  → permite el crecimiento optimo  a la bacteria. Caldo de  mueller hinton
•  Después se inicia con la primera técnica que es la de disco difusión (una de las forma de hacer el antibiograma) → se ubican unos discos que contienen un antibiótico especifico a una concentración especifica (ya están estandarizados).
• el antibiótico se difunde en profundidad y de manera radial para que al difundirse, la bacteria que ya esta sembrada crezca alrededor de él en masa o sea inhibido su crecimiento formando un halo de inhibición.
• Por otra parte, al evaluar la técnica de E-test  se repiten todos los pasos hasta la siembra de la bacteria en el agar, pero como el método de antibiograma es distinto, a diferencia de los discos, se ubican una tiras que tienen un gradiente de concentración y también hay una difusión, pero esa difusión va a variar dependiendo de donde esta la mayor concentración de antibiótico en la tira, que siempre va a estar  muy en el extremo superior de la tira. Tomándose como extremo superior la que lleva el nombre del antibiótico y va disminuyendo la concentración del antibiótico en dirección al extremo opuesto.
• Por otra parte existe la técnica de dilución   que es en microposos  y macrodilución que es en tubos. en la se expone el microrganismo a diferentes tubos o en diferentes posos con  concentraciones diferentes de un mismo antibiótico y lo que se va a evaluar es si hay crecimiento o no de la bacteria en cada una de esas diferentes concentraciones. Si lo hay (crecimiento) se va a observar turbidez si no lo hay, el liquido seguirá claro.   Si se forma crecimiento solo hasta determinado tubo, se dice que la concentración inhibitoria mínima o la concentración mas bajita que logra inhibir el crecimiento de la bacteria, es la concentración que hay en el tarro donde no hay turbidez que le sigue al tarro que si se observa turbio.

Observación de los resultados:

• Por disco difusión: (caso de staphylococcus  aureus evaluando la eritromicina como representante de los macrólidos→ actúa inhibiendo la síntesis de proteínas bacterianas)

Se va a encontrar el que el antibiótico se ha difundido y el resultado va a ser obtener un diámetro del halo llamado diámetro de inhibición. Este halo se va a comparar con unas categorías o unos puntos de corte.

• Por E-test: (Se esta probando vancomicina)

Se tiene una tira  que contiene un gradiente de concentración del antibiótico  de mayor en un extremo a menor en el extremo contrario. Aquí lo que se ve es una elipse de inhibición (la cual si hay inhibición por parte del antibiótico va a ser mas grande en el  extremo de mas concentración y mas pequeña en el extremo de menos concentración) y lo que se mide es el punto de corte donde empezó a inhibir (primera línea de inhibición). Lugar  de la tira con menor concentración que fue capaz de inhibir el crecimiento de la bacteria. Este punto se toma como la concentración inhibitoria mínima del antibiótico.

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